[发明专利]硫酸软骨素ABC酶融合蛋白制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201510711749.1 | 申请日： | 2015-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN105441471B | 公开（公告）日： | 2018-10-19 |
| 发明（设计）人： | 李晔;陈振娅;辛秀兰;陈亮;苏东海;章宇宁 | 申请（专利权）人： | 北京电子科技职业学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C12N9/88;C12N9/02;C12N1/21;C12P19/26 |
| 代理公司： | 北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙) 11017 | 代理人： | 韩登营 |
| 地址： | 100176 北京市大*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种表达硫酸软骨素ABC酶融合蛋白的方法，该方法包括：1)分别克隆硫酸软骨素ABC酶基因和3‑磷酸甘油醛脱氢酶蛋白基因，并连接上述基因，使得后续表达的3‑磷酸甘油醛脱氢酶蛋白和硫酸软骨素ABC酶蛋白N端连接；2)将连接的硫酸软骨素ABC酶融合蛋白基因重组到表达载体；3)将含有硫酸软骨素ABC酶融合蛋白基因的表达载体转化到宿主细胞中，进行表达；以及4)收获并纯化表达的硫酸软骨素ABC酶融合蛋白。使用该方法得到的活性硫酸软骨素ABC酶融合蛋白占总表达蛋白量的70％，使得后序纯化过程大大简化。得到的ChSase ABC I融合蛋白具有高酶活，能够用于生产硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。 | ||
| 搜索关键词： | 硫酸 软骨素 abc 融合 蛋白 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种制备硫酸软骨素ABC酶融合蛋白的方法，其中，所述方法包括：1)克隆并连接硫酸软骨素ABC酶融合蛋白基因，分别克隆所述硫酸软骨素ABC酶基因和3‑磷酸甘油醛脱氢酶蛋白基因，并连接上述基因，使得后续表达的3‑磷酸甘油醛脱氢酶蛋白和硫酸软骨素ABC酶蛋白N端连接；2)获得含有所述硫酸软骨素ABC酶融合蛋白基因的重组表达载体，将所述步骤1)连接的硫酸软骨素ABC酶融合蛋白基因重组到表达载体；3)表达所述硫酸软骨素ABC酶融合蛋白，将所述步骤2)中克隆的含有硫酸软骨素ABC酶融合蛋白基因的表达载体转化到宿主细胞中，进行表达；以及4)收获并纯化表达的所述硫酸软骨素ABC酶融合蛋白。
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