[发明专利]一种非衍生快速检测药用植物中结合氨基酸的方法

摘要

本发明公开了一种非衍生同时快速检测药用植物中结合氨基酸的方法，包括以下步骤：（1）高压脉冲酸水解结合氨基酸和水解液的冷冻及再融化等分析前处理；（2）超高压液相色谱-蒸发光散射检测方法建立；（3）药用植物中氨基酸含量测定。本发明采用高压脉冲电场法酸水解氨基酸具有操作简单，样品水解快速完全，试剂用量少，快速节能，环境污染小等优点。通过分析前处理过程添加冷冻及复溶环节，能通过“冰吐”作用，纯化目标物及减少后期对分离柱的污染，延长色谱柱的使用寿命；分析过程采用耐水的硅胶柱，有机试剂消耗少，绿色环保；更重要的一点采用蒸发光散射检测器无需衍生，操作简便，不引入衍生试剂及副反应，对于准确测定药用植物中氨基酸含量具有重要意义。

主权项

一种非衍生同时快速检测药用植物中结合氨基酸的分析方法，包括以下步骤：（1）高压脉冲酸水解结合氨基酸和水解液的冷冻及再融化分析前处理：取待测药用植物1.0g于水解管中，加入6mol×L^‑1盐酸溶液，除氧密封，设置电场强度10kv×cm^‑1‑30 kv×cm^‑1，料液比1:5‑1:15和脉冲时间30‑90S进行高压脉冲法水解，待冷却至室温后将水解液放置零下20‑60度冷冻2‑4小时，然后取出常温溶化，随后过滤，取滤液1mL氮吹仪吹干，用流动相溶解，过0.22 μm 滤膜过滤备用；超高压液相色谱‑蒸发光散射检测方法建立：准确称取各标准品用0.1 mol×L^‑1盐酸配制成0.5‑10 nmol×L^‑1的氨基酸标准液，采用Hilic色谱柱，Amide色谱柱以及亲水性C18色谱柱对其进行分离，以乙腈‑水含（0.1‑1％九氟丁酸溶液和三氟乙酸）为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱（A为离子对乙腈相，B为离子对水相）：0‑0.8min，0％A；0.8‑1.5min，12％A；1.5‑4min，15％A；4‑5min，61％A；5.1‑8min，61％A；8‑8.1min，0％A；8.1‑10min，0％A；分析时间10min；设置流速0.3‑0.5 ml×min^‑1，ELSD飘移管温度60‑80℃，载气流量20‑40 PSI上UPLC‑ELSD检测；各浓度分别进样2 μL测其峰面积，以进样浓度的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标绘制标准曲线；药用植物中氨基酸含量测定：按照上述液相色谱条件，对药用植物水解待测液样品中的氨基酸进行分离检测：进样2 μL，测定峰面积，根据标准曲线计算药用植物中氨基酸的含量。