[发明专利]大肠杆菌噬菌体MS2内标质控品的制备、应用和试剂盒

摘要

本发明涉及一种大肠杆菌噬菌体MS2内标质控品的制备方法、应用和试剂盒，该方法制备的噬菌体MS2内标质控品可作为在RNA病原体的荧光RT-PCR核酸检测试剂盒的内标质控物质，在RNA病原体的RT-PCR检测中能够准确地监控整个实验过程，以此可作为评判实验是否成功的标准。该方法制备的噬菌体MS2内标质控品有很好的稳定性，易保存(冻干保存时间≥1年)，方便运输，安全性高，作为内标质控品可真正做到从样本处理到扩增的全程质量检测。

主权项

一种大肠杆菌噬菌体MS2内标质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)宿主菌的制备：挑大肠杆菌ATCC 15597菌种接种在固体培养基上培养；再挑取单菌落接种至液体培养基中，扩大培养，得到含宿主菌的培养液；(2)噬菌体MS2单克隆的制备：挑噬菌体MS2用双层琼脂平板培养法培养18‑24小时，再挑取单个噬菌斑至含宿主菌的液体培养基中培养20‑24h，得到含噬菌体MS2的培养液；(3)噬菌体MS2的扩大培养：将步骤(1)制备的含宿主菌的培养液接种到液体培养基中，培养4‑5小时，得到细菌培养液，再将步骤(2)制备的含噬菌体MS2的培养液接种到细菌培养液中，培养过夜，取培养液离心，收集上清液，过滤即得到纯化的噬菌体MS2悬液；(4)噬菌体MS2的分析检测：取步骤(3)制备的噬菌体MS2用荧光RT‑PCR法检测Ct值，并用双层琼脂法测效价；(5)噬菌体MS2内标质控品的制备：用冻干稀释液将噬菌体悬液稀释至Ct值为18‑20，分装于离心管中，真空冷冻干燥，将所得冻干品冷冻保存。