[发明专利]一种利用海藻酸钠水凝胶制备细胞膜片的方法

摘要

本发明公开了一种可以用来构建细胞片层（cell sheet）的基底材料及利用其制备细胞膜片的方法。首先利用冷冻干燥及添加制孔剂的方法将海藻酸钠制成膜片，为了引入必要的反应基团，海藻酸钠需要经过化学改性，利用生物大分子对海藻酸钠基底表面或本体进行改性，即可用于接种细胞。最后在基底材料上接种细胞之后，通过培养环境的调控，促使细胞增殖及产生大量细胞外基质，以形成完整的细胞膜片，再使用一定浓度的柠檬酸钠溶液对基底材料海藻酸钠进行溶解，获得完整的具有良好生物学性能的细胞膜片。本发明上述技术具有底物可溶解、适用于大量细胞、操作简单、成本低的特点，避免了传统方法对细胞造成的影响，而且生物相容性好。

主权项

1.一种制备细胞膜片所用的基底材料，其特征在于，由如下方法制备得到：S1.称取海藻酸钠溶于纯水中，加入高碘酸钠，避光搅拌反应1～2h；S2.向S1得到的溶液中加入乙二醇，继续反应0～2h；S3.将S2反应后的溶液进行透析3～7天，勤换水；S4.透析完毕后，真空冷冻干燥，得到氧化的海藻酸钠；S5.称取氧化的海藻酸钠和海藻酸钠，配置成总海藻酸钠浓度为1～5%w/v的混合溶液，向混合溶液中加入氯化钠，使氯化钠终浓度为2mol/L以下；S6.将S5所得产物加入培养板的孔中，置于‑80℃冷冻5～18h后，真空冷冻干燥；S7.将S6处理后的培养板置于无水乙醇中浸没完全，再缓缓加入2%氯化钙溶液对材料进行交联，最后，使用去离子水洗涤去除残余于材料中的氯化钙溶液；S8.将S7处理后的培养板灭菌后，利用生物大分子对其进行交联改性，得到表面改性的海藻酸钠水凝胶，即为制备细胞膜片所用的基底材料；其中，步骤S8所述利用生物大分子对其进行交联改性包括以下3种方式：（1）加入COL‑I溶液进行交联；（2）加入EDC/NHS浸泡12 h，再加入明胶12 h后，最后再加入EDC/NHS，摇床混匀进行交联；或（3）加入pH4.5~4.7的RGD，再分次少量加入EDC/NHS，摇床混匀进行交联。