[发明专利]UHPLC‑MS/MS同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的方法

摘要

本发明涉及一种使用UHPLC‑MS/MS技术同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的方法，属于中药成分分析领域。本发明所建立同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的分析方法专属性强、快速、灵敏且准确可靠，在完成含量测定的同时又可以准确给出化合物质量数信息达到成分鉴别的效果，该方法可以为防己黄芪汤煎剂全面质量控制提供依据。

主权项

一种使用UHPLC‑MS/MS同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)混合对照品溶液的配制：分别精密称取粉防己碱，防己诺林碱，白术内酯I，白术内酯III，毛蕊异黄酮葡萄糖苷，甘草酸，甘草苷，异甘草苷，甘草素，异甘草素对照品适量，加甲醇溶解稀释，摇匀，得到浓度分别为104.16，117.54，23.55，35.63，635.92，2009.56，7920.00，1944.03，135.55，39.01ng·mL^‑1的混合对照品溶液；(2)供试品溶液的配制：按照防己黄芪汤的处方比例，分别精密称取粉防己12g，黄芪15g，白术9g，炙甘草6g，于煎药锅中，先加420mL的水，浸泡1h，煮沸后，保持微沸状态煎煮30min，以四层纱布滤出药液，药渣再加336mL水煮沸后，保持微沸状态煎煮30min，四层纱布滤出药液，合并两次煎液，加适量水定容到1000mL，精密移取药液2mL置50mL量瓶中，加60％甲醇溶液15mL，超声15min，放冷，用60％甲醇溶液稀释至刻度，12000r/min离心10min，吸取上清液作为供试品溶液；(3)测定法色谱条件：采用UHPLC–MS/MS法测定混合对照品及供试品的浓度，应用的色谱条件：色谱柱：C₁₈色谱柱，规格为2.1mm×100mm,粒径为3.5μm；流速：0.4mL·min^‑1；柱温：30℃；进样量：10μL；梯度洗脱条件：流动相为0.1％甲酸水溶液与乙腈的混合物，0～0.8min，乙腈的体积分数从5％线性增加至50％，0.1％甲酸水溶液的体积分数从95％线性减少至50％，0.8～3.0min，乙腈的体积分数线性增加至90％，0.1％甲酸水溶液的体积分数线性减少至10％，3.0～3.1min，乙腈的体积分数线性减少至5％，0.1％甲酸水溶液的体积分数线性增加至95％；质谱参数条件：质谱扫描方式为多反应监测模式(MRM)，使用下列参数：离子源温度：500℃；Q1/Q3(m/z)：623.2/381.3；609.3/367.1；233.1/187.2；249.1/231.0；447.2/285.1；821.3/351.2；417.1/255.1；417.1/255.1；256.2/135.0；256.2/135.0；去簇电压(DP)：39.86；27.13；63.96；54.8；57；‑14.67；‑17.32；‑17.32；‑65.84；‑65.84V；碰撞能量(CE)：53.9；49.43；22.61；14.42；16.11；‑52.15；‑23.39；‑23.39；‑21.65；‑21.65V；入口电压(EP)：3.93；4.29；6.81；3.14；6.38；‑13.72；‑10.15；‑10.15；‑9.14；‑9.14V；碰撞室出口电压(CXP)：10.83；27.3；14；14；14；‑22.52；‑21.88；‑21.88；‑17；‑17V；雾化气：55psi；辅助加热气：55psi；气帘气：35psi；氮气作为喷雾辅助气体。