[发明专利]用于茶氨酸生产的质粒及其相应工程菌的构建与使用方法有效

专利信息
申请号: 201510755912.4 申请日: 2015-11-09
公开(公告)号: CN105200075B 公开(公告)日: 2019-01-15
发明(设计)人: 李晚军;王钦芳;范明;陈纹锐 申请(专利权)人: 四川同晟生物医药有限公司
主分类号: C12N15/70 分类号: C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12P13/04
代理公司: 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 代理人: 吴开磊
地址: 618019 四*** 国省代码: 四川;51
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摘要: 发明涉及基因工程领域,具体而言,涉及一种用于茶氨酸生产的质粒及其相应工程菌的构建与使用方法,本发明提供一种γ‑谷氨酰甲胺合成酶的大肠杆菌表达质粒,所述质粒中的目的基因序列经过了优化,在大肠杆菌中表达效率高,其中的γ‑谷氨酰甲胺合成酶基因表达出的γ‑谷氨酰甲胺合成酶本身活性就很高,可解决现有的用于茶氨酸的酶活性低下的问题;而且其催化的底物为低成本的谷氨酸和乙胺,可解决现有技术底物成本较高的问题。本发明还提供了一种茶氨酸基因工程菌及其配套的培养方法,该基因工程菌由γ‑谷氨酰甲胺合成酶的大肠杆菌表达质粒转化得到,可用于生产茶氨酸,易于培养,可解决现有菌株不够稳定的缺点。
搜索关键词: 用于 氨酸 生产 质粒 及其 相应 工程 构建 使用方法
【主权项】:
1.一种茶氨酸基因工程菌用于生产L‑茶氨酸的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)、将基因工程菌进行接种于含有所述工程菌所转入的质粒具有抗性对应的抗生素的LB固体选择培养基上进行筛选培养,筛选出抗性菌株;所述基因工程菌由γ‑谷氨酰甲胺合成酶的大肠杆菌表达质粒转化至大肠杆菌表达菌株中所得到;所述表达质粒上的γ‑谷氨酰甲胺合成酶的碱基序列为SEQ ID NO:1所示;所述大肠杆菌表达菌株为Transetta;所述筛选培养的培养条件为:36~38℃恒温倒置培养12~16h;2)、将所述抗性菌株进行诱导培养,以诱导gmas基因表达;在所述培养过程中,用SDS‑PAGE方法检测γ‑谷氨酰甲胺合成酶的表达情况,检测合格后通过低温离心发酵培养基获得湿菌体;3)、利用所述湿菌体在生物转化反应体系中进行催化底物生成L‑茶氨酸;在所述的生物转化反应体系中:催化底物反应液中包括:130~180mM谷氨酸钠、130~180mM乙胺盐酸盐、10~20mM六水氯化镁、3~8mM氯化锰、3~8mM ATP;培养温度为28~32℃,摇菌转速为100~300rpm,培养时间为35~45h。
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