[发明专利]一种交联羧甲基化琼脂糖基凝胶微球的制备方法

摘要

本发明公开了一种制备交联羧甲基化琼脂糖基凝胶微球的方法，是将琼脂糖羧甲基化，然后利用悬浮分散法制得羧甲基化琼脂糖基凝胶微球，然后利用环氧氯丙烷与羧甲基化琼脂糖基凝胶微球发生交联反应，进而制得交联羧甲基化琼脂糖基凝胶微球。应用本发明方法每一步骤都易于控制，解决了通常制备交联羧甲基化琼脂糖基凝胶微球时，羧甲基化反应对微球机械强度和孔径影响不易控制的缺点，为羧甲基化琼脂基糖凝胶微球层析介质分离性能的稳定性提供了保障。实验证实本发明方法制备的凝胶微球对牛血清蛋白具有良好的吸附能力，在0.1M的盐酸和0.1M NaOH溶液中浸泡24小时，其形状没有发生明显的变化。预示本发明方法具有良好的应用前景。

主权项

一种交联羧甲基化琼脂糖基凝胶微球的制备方法，步骤是：(1)将琼脂糖和95％的乙醇按1g:3～8mL的比例加入反应器中，然后按琼脂糖和NaOH为1g:1.4～2.0g的比例加入NaOH，室温下搅拌12±1h，再按氯乙酸和NaOH为1g：1.4～2.0g的比例滴加氯乙酸溶液，并使氯乙酸与总反应液的体积为1g:3～12mL的比例，在温度20～45℃下反应2～4h；然后升温至60～65℃反应8±1h，完毕后，用滤纸过滤，收集的沉淀物用95％乙醇洗涤并在80±2℃下干燥24h以上，得到羧甲基化琼脂糖；其中，所述氯乙酸溶液是按氯乙酸与95％乙醇为1g:1～4mL的比例配制；(2)按设定量称取羧甲基化琼脂糖，加入水中并加热溶解，配成浓度以g/mL计为3～6％的羧甲基化琼脂糖溶液，在90±2℃温度条件下保温备用；(3)将含有Span 80的大豆油作为油相加入反应器，其中所述Span 80在大豆油的含量以体积百分比计为4～9％，在90±2℃下以800r·min‑1转速搅拌0.5～1h后将步骤(2)制得的羧甲基化琼脂糖溶液与油相按体积比为1:4～1:10的比例加入油相中，继续在800r·min‑1转速下搅拌45±5min，然后用冰水浴将反应液冷却至10～30℃，再在200r·min‑1转速下搅拌20±3min，完毕后，用250目的滤布过滤，收集的沉淀物，用95％乙醇洗涤去残余的油相，沉淀为羧甲基化琼脂糖基凝胶微球；按羧甲基化琼脂糖基凝胶微球与50％乙醇按体积比为1:10的比例将所述羧甲基化琼脂糖基凝胶微球置于50％乙醇中贮存，备用；(4)取步骤(3)贮存的羧甲基化琼脂糖基凝胶微球用滤纸过滤去除液体，再按羧甲基化琼脂糖基凝胶微球与50％乙醇体积比为1:1～4的比例配成反应体系，并按NaOH与反应体系为1g:10～30mL的比例向该体系中加入NaOH，搅拌反应5～10h；然后按NaOH与环氧氯丙烷为1g:1.2～2.0mL的比例在20～45℃下向该体系中缓慢滴加环氧氯丙烷溶液，并使环氧氯丙烷的加入量以体积比计为总反应液体积的4‑15％，其中所述环氧氯丙烷溶液是按环氧氯丙烷与95％乙醇为1mL:1～3mL的比例配制；滴加完毕后，在45℃温度条件下反应2～4h，然后升温至65±5℃反应6～10h，当反应液降至室温后，用250目的滤布过滤，收集微球并用蒸馏水洗净，用分样筛筛分出120～250目的微球样品，即获得交联羧甲基化琼脂糖基凝胶微球，将所述交联羧甲基化琼脂糖基凝胶微球置于20％乙醇中贮存。