[发明专利]临床治疗级细胞治疗用黑色素细胞(melanocytes)规模化制备人类细胞外基质筛选培养方法

摘要

本发明公开了临床治疗级细胞治疗用黑色素细胞(melanocytes)创新培养方法。黑色素细胞培养、筛选、扩增技术，这些瓶颈一直是生物学细胞领域研究热点和难点，目前利用贴壁特性进行分离并采用三维培养扩增手段获得。该发明适合依赖扩增贴壁型细胞并提供三维高拟体内细胞外基质系统进行目标细胞水平的筛选与分离。高模拟体内贴附环境，体外培养成体(胚胎皮肤)细胞的生物细胞新培养技术。高模拟底物所在环境黏附筛选培养目标黑色素细胞，具有高传代能力，高增殖能力。筛出免疫原性细胞安全获得免疫逃逸，延长移植时间增加组织工程临床应用，促进创面色素愈合与治疗色素异常性皮肤病(白癜风)提供了绝对优势临床治疗级细胞的解决方案。

主权项

一种用于筛选和培养临床治疗级细胞治疗用黑色素细胞(melanocytes)规模化制备的培养基组合，其特征在于，其包括；培养液A：灭活胎牛血清40～60ml、转铁蛋白5～15μg/ml、维生素B4 0.5～1×10^‑4/L、维生素C1～3μg/ml、胰岛素2～4μg/ml、青霉素50‑100u/ml、霍乱霉素2.5～4.5u/L、EGF5～25ng/m1、十四烷酰佛波醇‑13‑乙酯(TPA)0.1～0.3μg/ml、G418 80～100μg/ml、链霉素50～100μg/ml氢化可的松0.4μg/ml、商用培养基DMEM/F12(3∶1)定容到500ml；培养液B：灭活胎牛血清80ml、转铁蛋白6～17μg/ml、维生素B40.5～1×10^‑4/L、维生素D2 1～3μg/m1、维生素C1～3μg/ml、胰岛素2～3μg/ml、节丝霉素B0.2～0.6μg/ml、霍乱霉素2.5～4.5u/L、EGF5～25ng/ml、牛脑垂体提取物(BPE)1～3mg/L、氢化可的松0.3μg/ml、链霉素50～100μg/ml、十四烷酰佛波醇‑13‑乙酯(TPA)0.1～0.3μg/ml、内皮素‑115～30μg/ml、bFGF5～15ng/ml、G41880～100μg/ml、腺苷10～25mg/ml、商用培养基DMEM与商用培养基F12(1∶1)定容到500ml；配制培养液C：灭活胎牛血清60ml、转铁蛋白6～17μg/ml、维生素B40.5～1×10^‑4/L、维生素D2 1～3μg/m1、维生素C1～3μg/ml、胰岛素2～3μg/ml、节丝霉素B0.2～0.5μg/ml、霍乱霉素2.5～4.5u/L、EGF5～25ng/ml、牛脑垂体提取物(BPE)1.5～3mg/L、链霉素50～80μg/ml、氢化可的松0.3μg/ml、十四烷酰佛波醇‑13‑乙酯(TPA)0.1～0.3μg/ml、内皮素‑115～30μg/ml、bFGF5～15ng/ml、G41860～80μg/ml、腺苷10～25mg/ml、商用培养基DMEM与商用培养基F12(1∶1)定容到500ml；