[发明专利]一种用青蒿生产菌丝霉素的方法有效
| 申请号： | 201510777822.5 | 申请日： | 2015-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN105255939B | 公开（公告）日： | 2018-12-25 |
| 发明（设计）人： | 夏新界;崔延春;余艳;尹晟 | 申请（专利权）人： | 长沙中科晶博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/14 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 410125 湖南省长沙市芙蓉*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用青蒿生产菌丝霉素的方法，包括以下步骤：a、改造并获得载体T202 b、优化并扩增菌丝霉素基因；c、构建青蒿细胞中表达菌丝霉素基因的重组质粒T202‑Plec；d、用重组质粒T202‑Plec转化农杆菌EHA105细胞；e、筛选阳性菌株，并进行酶切鉴定；f、转化青蒿，获得阳性含抗菌肽菌丝霉素的青蒿转化植株；g、实时定量PCR(qRT‑PCR)鉴定菌丝霉素的表达量。本发明采用的青蒿表达系统具有以下优点：根据青蒿的密码子偏好性，对菌丝霉素基因的核苷酸序列进行了优化，保证了高效和稳定的mRNA转录、快速和准确的翻译以及较高的外源蛋白质积累；植物表达菌丝霉素成本低、安全、经济效益好；表达的蛋白产品可直接用于添加，无须纯化。 | ||
| 搜索关键词： | 青蒿 菌丝 菌丝霉素基因 重组质粒 密码子偏好性 实时定量PCR 核苷酸序列 外源蛋白质 细胞 表达系统 蛋白产品 酶切鉴定 阳性菌株 植物表达 转化植株 表达量 抗菌肽 农杆菌 构建 扩增 转化 优化 筛选 翻译 生产 积累 改造 安全 保证 | ||
【主权项】：
1.一种用青蒿生产菌丝霉素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)改造载体T202；改造后的载体T202序列如SEQ ID NO.1所示；(2)构建青蒿中表达改造后的菌丝霉素基因的重组质粒T202‑Plec，重组质粒T202‑Plec的序列如SEQ ID NO.2所示；(3)用重组质粒T202‑Plec转化青蒿；(4)筛选阳性转基因青蒿植株，获得生产菌丝霉素的青蒿植株。
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