[发明专利]一种防治苹果树腐烂病的生防菌发酵液的制备方法

摘要

本发明公开了一种防治苹果树腐烂病的生防菌发酵液的制备方法，本发明从山西省苹果产区临汾市苹果园的果树枝干上分离筛选获得2株抑制苹果树腐烂病菌较好的菌株LF17、LF18，经菌株菌落特征、菌株显微特征及16SrDNA序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌(B.subtilis)。通过以下步骤制备生防菌发酵液：S1、培养基的制备：S2、拮抗菌株的活化：S3、拮抗菌株的液体培养：S4、过滤浓缩发酵液；S5、拮抗菌发酵液田间防治药剂的制备；S6、拮抗菌发酵液膏剂田间防治药剂的制备。本发明所得的生防菌发酵液可有效防治苹果腐烂病，对人畜相对安全、环境兼容性好、不易产生抗药性、伤口愈合快、病疤复发率低。

主权项

一种防治苹果树腐烂病的生防菌发酵液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、培养基的制备：NA培养基：称取酵母浸膏10.0g，牛肉浸膏15.0g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.009g，琼脂粉8.5g，葡萄糖30g混合后，用酸度计测，加NaOH或HCl调节pH至6.5，加水定容至1L，分装于250mL三角瓶中，装瓶量为80mL，121℃高压蒸汽灭菌20min；NB培养基：称取酵母浸膏10.0g，牛肉浸膏15.0g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.009g，葡萄糖30g混合后，用酸度计测，加NaOH或HCl调节pH至6.5，加水定容至1L，分装于250mL三角瓶中，装瓶量为80mL，121℃高压蒸汽灭菌20min；S2、拮抗菌株的活化：将菌株LF17、LF18的菌株接种在NA培养基上，25℃恒温培养2d，其中，枯草芽孢杆菌LF17的保藏号为NO：SAASIPPLF17；枯草芽孢杆菌LF18的保藏号为NO：SAASIPPLF18；S3、拮抗菌株的液体培养：挑取步骤S2中活化的菌株LF17、LF18接种于装瓶量为80mL/250mL的NB培养基；150r·min^‑1，25℃恒温振荡培养5d，得到发酵液。S4、过滤浓缩发酵液：将步骤S3中制备的发酵液，经滤纸过滤后，浓缩为1.5倍的原发酵液浓度和3.0倍的原发酵液浓度的浓缩发酵液，4℃条件下保存备用；S5、拮抗菌发酵液田间防治药剂的制备：将步骤S4所得的1.5倍的原发酵液浓度的浓缩发酵液与青霉素钠0.001g·mL^‑1、溶液质量为3％‑5％的矿物油、溶液质量为2％‑3％的吐温80混合搅拌均匀，装瓶备用；S6、拮抗菌发酵液膏剂田间防治药剂的制备：将步骤S4所得的1.5倍的原发酵液浓度的浓缩发酵液与青霉素钠0.001g·mL^‑1、溶液质量为3％‑5％的矿物油、溶液质量为2％‑3％的吐温80、溶液质量为0.5％的黄原胶混合搅拌均匀制成膏剂，装瓶备用。