[发明专利]纳米金修饰的石墨烯用于蛋白质N末端分离的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体为一种纳米金修饰的石墨烯用于蛋白质N末端分离的方法。本发明方法步骤为，首先合成纳米金修饰的石墨烯（G@PDA@Au），再对氨基封闭后的蛋白进行酶解，对酶解液进行巯基衍生后，利用G@PDA@Au对衍生上巯基的非N末端肽段进行去除，最后利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行蛋白质N末端的检测。本发明方法可以方便高效地去除非N末端肽段，提高蛋白质N末端肽段鉴定效果。

主权项

1.一种纳米金修饰的石墨烯用于蛋白质N末端分离的方法，其特征在于，具体步骤为：首先，合成纳米金修饰的石墨烯；然后，对蛋白上的所有游离氨基进行封闭，再对封闭蛋白进行溶液酶解；然后，用特劳特试剂对非N末端肽段进行巯基衍生，加入纳米金修饰的石墨烯对含巯基的非N末端肽段进行分离富集；最后，利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行蛋白质N末端的检测；所述的合成纳米金修饰的石墨烯的具体步骤如下：（1）取一定质量石墨烯分散在10 mM Tris‑HCl中，再加入4‑10重量的多巴胺，室温下搅拌4‑12 h；（2） 将多巴胺包覆的石墨烯经离心后，用水和乙醇交替洗涤数次，再在真空下烘干4‑16 h；（3）取一定质量多巴胺包覆的石墨烯分散在50‑100 ml 水中，加入终浓度为0.1‑0.5 mM无水合氯金酸，加热至85‑90℃后，加入5‑10 mM柠檬酸三钠，保持加热1小时以上，经离心，用水和乙醇交替洗涤数次后，用真空干燥，得到纳米金修饰的石墨烯；所述的对蛋白上的所有游离氨基进行封闭，再对封闭蛋白进行溶液酶解的具体步骤如下；（1）将蛋白溶于高浓度盐酸胍中，用等体积40‑100 mM 三乙胺碳酸氢盐稀释后，5‑8 mM 二硫苏糖醇，60℃以上反应至少0.5小时后，再加入二硫苏糖醇2‑2.5倍浓度的碘乙酰胺，闭光反应0.5‑1小时，再加入20‑60 mM 甲醛和10‑30 mM 氰基硼氢化钠反应4‑16小时；（2）用pH 7.2‑8.5的三乙胺碳酸氢盐对蛋白进行溶液置换，并重复2次以上置换动作，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的加入量为蛋白的2.5%‑5%，进行过夜酶解；所述的用特劳特试剂对非N末端肽段进行巯基衍生，加入纳米金修饰的石墨烯对含巯基的非N末端肽段进行分离富集的具体步骤为；（1）取一单位质量蛋白酶解液加入0.2‑20倍单位质量特劳特试剂, 20‑60℃下反应0.5 小时以上或过夜；（2）在上述混合液中加入200‑400倍质量的纳米金修饰的石墨烯，20‑60℃下反应1.5 ‑2.5 h，取上清液，用于供基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析鉴定。