[发明专利]一种用于同时检测绵羊和山羊六种病毒的多重PCR试剂盒

摘要

一种用于同时检测绵羊和山羊携带的六种病毒的多重PCR试剂盒，包括六对特异性引物，其中，用于蓝舌病病毒检测的引物分别为BTV‑F和BTV‑R；用于口蹄疫病毒检测的引物分别为FMDV‑F和FMDV‑R；用于小反刍兽疫病毒检测的引物分别为PPRV‑F和PPRV‑R；用于绵羊痘病毒检测的引物分别为SPPV‑F和SPPV‑R；用于山羊痘病毒检测的引物分别为GTPV‑F和GTPV‑R；用于羊口疮病毒检测的引物分别为ORFV‑F和ORFV‑R；引物序列分别为SEQ ID NO:1～12的核苷酸序列。本发明能同时检测绵羊和山羊临床样品中蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊痘病毒、山羊痘病毒和羊口疮病毒六种病毒核酸，且具有敏感性强、特异性高、操作简单、节约检测时间的特点。

主权项

1.一种用于同时检测绵羊和山羊携带的六种病毒的多重PCR试剂盒，其特征在于，所述多重PCR试剂盒包括六对特异性引物，其中，用于蓝舌病病毒检测的引物分别为BTV‑F和BTV‑R，引物序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；用于口蹄疫病毒检测的引物分别为FMDV‑F和FMDV‑R，引物序列分别为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；用于小反刍兽疫病毒检测的引物分别为PPRV‑F和PPRV‑R，引物序列分别为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；用于绵羊痘病毒检测的引物分别为SPPV‑F和SPPV‑R，引物序列分别为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；用于山羊痘病毒检测的引物分别为GTPV‑F和GTPV‑R，引物序列分别为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；用于羊口疮病毒检测的引物分别为ORFV‑F和ORFV‑R，引物序列分别为SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；所述多重PCR试剂盒还包括阳性对照、阴性对照、反转录液、PCR混合液、去离子水；所述BTV‑F、BTV‑R、FMDV‑F、FMDV‑R、PPRV‑F、PPRV‑R、SPPV‑F、SPPV‑R、GTPV‑F、GTPV‑R、ORFV‑F、ORFV‑R的摩尔比分别为2：2：2：2：2：2：2：2：3：3：1：1；所述BTV‑F和BTV‑R、FMDV‑F和FMDV‑R、PPRV‑F和PPRV‑R、SPPV‑F和SPPV‑R、GTPV‑F和GTPV‑R、ORFV‑F和ORFV‑R六对引物在多重PCR的扩增的退火温度为55℃；所述引物BTV‑F和BTV‑R、FMDV‑F和FMDV‑R、PPRV‑F和PPRV‑R、SPPV‑F和SPPV‑R、GTPV‑F和GTPV‑R、ORFV‑F和ORFV‑R在多重PCR反应体系中的终浓度分别为1.0pmol/μL、1.0pmol/μL、1.0pmol/μL、1.0pmol/μL、1.5pmol/μL、0.5pmol/μL。