[发明专利]一种用于非治疗和非诊断目的检测线粒体tRNALeu(UUR)3253T>C突变的方法有效
| 申请号： | 201510812025.6 | 申请日： | 2015-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN105274242B | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 管敏鑫;薛凌;郑斌娇;唐霄雯;林枝 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/683 | 分类号： | C12Q1/683 |
| 代理公司： | 温州金瓯专利事务所(普通合伙) 33237 | 代理人： | 黄肇平 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 一种用于非治疗和非诊断目的检测线粒体tRNALeu(UUR)3253T>C突变的方法。所述方法包括DNA的提取、特异性引物设计、特异性条带PCR扩增、专一性限制性内切酶BstEII酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定等。本发明实现了几小时内出结果，且一种酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，结果准确。本发明还提供检测原发性高血压相关的线粒体tRNALeu(UUR)3253T>C突变检测试剂盒。检测所需仪器要求低、所需试剂成本小、所需操作简单易掌握、所用方法稳定，特异性好等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 线粒体 trna sup leu uur 3253 突变 试剂盒 及其 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于非治疗和非诊断目的检测线粒体tRNALeu(UUR) 3253T>C突变的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：（1）提取全基因组DNA：运用蛋白酶K消化裂解蛋白质，酚‑氯仿‑异戊醇法，提取全基因组DNA；（2）特异性PCR扩增及酶切：根据人类线粒体基因剑桥参考序列特异性设计一对引物3253F、3253R，该引物特异性的扩增含有3253位点的序列，然后利用专一性限制性内切酶 BstEII 特异性的识别GGTNACC回文结构，3253位点碱基突变后，产生限制性内切酶 BstEII识别的回文结构，利用限制性内切酶 BstEII识别的专一性，对样本的全基因组DNA进行PCR扩增和酶切；（3）将酶切后的产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据酶切后产生的DNA片段大小不同，检测线粒体tRNALeu(UUR)基因3253位点是否发生突变。
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