[发明专利]一种分隔固定多种酶的方法

摘要

一种分隔固定多种酶的方法，属于固定化酶制备领域。本发明分为以下步骤：首先将酶A原位包埋固定在聚合物基材表面的三维网络之中；之后在可见光的照射下，固定有酶A的三维网络层表面的光感应休眠种重新产生表面自由基，引发混合有酶B的单体溶液进行二次活性接枝交联聚合，将酶B原位包埋固定在第一层表面的三维网络之中，形成第二层交联网络；重复上述步骤，可将不同的酶分别包埋在更多的网络层之中。固定化过程中可以保存大部分酶的活性。将不同的酶分开固定在不同的网络层之中，既可以避免相互干扰抑制，又可以共同完成一个复杂的化学反应。聚合物基材可以提高复合膜的机械强度，增强了酶膜的稳定性，更有利于酶膜的回收再利用。

主权项

1.一种分隔固定多种酶的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将异丙基硫杂蒽酮的丙酮溶液均匀地涂覆在聚合物膜的一侧，然后将涂覆有异丙基硫杂蒽酮的丙酮溶液的膜置于两片石英片之间，随后将此体系置于汞灯下室温照射1‑5分钟，光强为0.9mW/cm2‑9mW/cm2，引入表面可见光休眠基；(2)将含有游离酶A的单体可聚合溶液涂敷在接枝有异丙基硫杂蒽酮的聚合物膜一侧，然后将涂覆有溶液的膜置于两片透光片之间，随后将此体系置于可见光灯下室温照射20‑180分钟，光强为0.3mW/cm2‑3mW/cm2，对酶A进行网布固定；(3)将含有游离酶B的单体可聚合溶液涂敷在包埋有酶A的网布层之上，然后将涂覆有溶液的膜置于两片透光片之间，随后将此体系置于可见光灯下室温照射20‑180分钟，光强为0.3mW/cm2‑3mW/cm2，在酶A网布层上对酶B进行网布固定；步骤(1)中所述异丙基硫杂蒽酮的丙酮溶液浓度为0.5‑4M；步骤(2)和(3)中所述的单体为聚乙二醇二丙烯酸酯，聚乙二醇双甲基丙烯酸酯或亚甲基双丙烯酰胺；步骤(2)和(3)中所述单体可聚合溶液组成如下：酶质量百分含量为0.01％‑20％，可聚合单体的质量百分含量为20％‑60％，余量为水或pH范围为4‑9的缓冲溶液。