[发明专利]一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法

摘要

一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，属于分子生物技术领域。CTAB法提取DNA的接种选用含菌种的细沙直接接种、和/或用孢子悬液接种后再添加细沙培养、和/或培养的菌丝在提取DNA磨样时添加细沙磨样，至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末）时止。上述一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，可以显著提高提取的DNA的含量，并且对DNA的品质及得率都有显著提高；且该方法操作方便、实验稳定性强、可重复性高、准确快捷，在满足DNA提取质量的同时，又可在磨样环节大大节省劳动强度，即使大量提取DNA样品时一样有较高的磨样速度，极大的缩短了磨样时间与人磨样的疲劳度及提取失败的概率。

主权项

1.一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，其特征在于用CTAB法提取DNA的接种时直接用保菌的含目的菌的细沙接种、和/或用配制的孢子悬液均匀涂板接种后再加入细沙培养、培养的菌丝在提取DNA磨样时加入细沙磨样，所有样品均需磨样至菌丝呈现丝滑状超细粉末时止；CTAB法提取DNA的接种时用保菌的含目的菌的细沙直接接种包括以下步骤：1)在SDAY平板上铺上一层灭菌后的玻璃纸，加入100‑200 µL的0.02%吐温水，再用含保有目的菌的60‑120目细沙0.1‑0.4g接种至SDAY玻璃纸上用涂棒均匀涂板， 24‑26ºC培养2‑3天；2）然后刮取玻璃纸上的菌丝放入‑70℃冰箱预冷的研钵中，加液氮进行快速研磨2‑8 min至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末时止，再按照CTAB法步骤操作，提取过程减少在空气中暴露，所有离心过程使用冷冻离心机在4℃下进行；CTAB法提取DNA的孢子悬液涂板后添加细沙方式接种包括以下步骤：1）用灭菌后的0.02%吐温水配制成1×107个/ml的孢子悬液，取100‑200 µL悬液用涂棒均匀涂板接种于SDAY平板表面的玻璃纸上，再添加60‑120目灭菌后的细沙0.1‑0.4 g至接种的平板上，然后24‑26℃培养2‑3天；2）然后刮取玻璃纸上的菌丝放入‑70℃冰箱预冷的研钵中，加液氮进行快速研磨2‑8 min至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末时止，再按照CTAB法步骤操作，提取过程应尽量减少在空气中暴露，所有离心过程使用冷冻离心机在4℃下离心；CTAB法用培养的菌丝在提取DNA磨样时加入细沙磨样包括以下步骤：1)用含目的菌的细沙和/或配制成的1×107个/ml的孢子悬液接种于SDAY平板表面的玻璃纸上，24‑26℃培养2‑3天；2)然后刮取玻璃纸上的菌丝放入‑70℃冰箱预冷的研钵中，加入60‑120目的灭菌后的细沙0.1‑0.4 g加液氮进行快速研磨2‑8 min至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末时止，再按照CTAB法步骤操作，提取过程减少在空气中暴露，所有离心过程使用冷冻离心机在3‑5℃下离心；所述丝滑状超细菌丝 粉末为600‑1000目。