[发明专利]对样品中目标核酸序列进行偏向扩增的方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201510834275.X | 申请日： | 2015-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN107338240B | 公开（公告）日： | 2020-11-24 |
| 发明（设计）人： | 葛猛;王宏伟 | 申请（专利权）人： | 葛猛;北京福安华生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12M1/38;C12M1/00;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 | 代理人： | 王达佐;洪欣 |
| 地址： | 100070 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： |
提供对样品中相对于野生型形式具有突变的目标核酸序列进行偏向扩增的方法，包括：提供与目标核酸序列的野生型形式的至少一部分的正义链和/或反义链互补的单链封闭序列，封闭序列中包含一处或多处锁核酸置换；提供包含样品、封闭序列和根据目标序列设计的正向和反向引物的PCR反应体系并进行循环扩增反应，变性步骤包括：升温至足够高的温度，使封闭序列与样品中的核酸接触，随后降温至第一温度使封闭序列与目标核酸序列以及目标序列的野生型形式形成双链体，第一温度高于引物与模板的退火温度，随后升温至第二温度，第二温度比封闭序列与目标序列的野生型形式形成的双链体的熔解温度(T |
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| 搜索关键词： | 样品 目标 核酸 序列 进行 偏向 扩增 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
对样品中目标核酸序列进行偏向扩增的方法，所述目标核酸序列相对于其野生型形式具有一处或多处突变，所述方法包括以下步骤：(1)提供与所述目标核酸序列的野生型形式的至少一部分的正义链和/或反义链互补的单链封闭序列，其中所述封闭序列中包含一处或多处锁核酸置换；(2)提供包含所述样品、封闭序列和根据所述目标序列设计的正向和反向引物的PCR反应体系并进行循环扩增反应，其中变性步骤包括：升温至足够高的温度，使所述封闭序列与所述样品中的核酸接触，随后降温至第一温度使所述封闭序列与所述目标核酸序列以及目标序列的野生型形式形成双链体，其中所述第一温度高于所述引物与模板的退火温度，随后升温至第二温度，所述第二温度比所述封闭序列与所述目标序列的野生型形式形成的双链体的熔解温度(Tm)低约1‑5℃，并且高于目标序列的野生型形式双链体的Tm；以及(3)任选地，分离和纯化步骤(2)获得的扩增产物。
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