[发明专利]一种线粒体tRNAThr 15909A〉G突变检测方法及其试剂盒在审
| 申请号： | 201510835273.2 | 申请日： | 2015-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN105349656A | 公开（公告）日： | 2016-02-24 |
| 发明（设计）人： | 管敏鑫;薛凌;唐霄雯;郑斌娇;林枝 | 申请（专利权）人： | 温州迈拓生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 温州金瓯专利事务所(普通合伙) 33237 | 代理人： | 黄肇平 |
| 地址： | 325000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明建立了一种线粒体tRNAThr 15909A>G突变检测方法及其试剂盒。所述方法包括DNA的提取、特异性引物设计、特异性条带PCR扩增、专一性限制性内切酶HpyCH4V酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定等。位于线粒体tRNAThr 15909A>G突变的DNA样本经特异性PCR扩增后含有可被专一性限制性内切酶HpyCH4V特异性识别的TGCA回文结构，进而进行快速酶切为两个小片段，经琼脂糖凝胶电泳后跑出两条带。本发明还提供检测线粒体tRNAThr 15909A>G突变检测试剂盒。本发明有检测所需仪器要求低、所需试剂成本小、用所需方操法作稳简定、单易快速掌、握、准所确，特异性好等优点。本发明有利于建立线粒体tRNAThr突变完善的筛查技术，可广泛推广于临床检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 线粒体 trnathr 15909 突变 检测 方法 及其 试剂盒 | ||
【主权项】：
一种检测线粒体tRNAThr 15909A>G突变的方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)提取全基因组DNA；(2)设计特异性引物：根据人类线粒体基因剑桥参考序列(Human Mitochondrial DNA Revised Cambridge Reference Sequence，GenBank登陆号：NC_012920.1)在15909位点前后345bp和183bp处设计上游引物15909F、下游引物15909R；(3)特异性条带PCR扩增；(4)专一性限制性内切酶HpyCH4V酶切：所述专一性限制性内切酶HpyCH4V特异性的识别TGCA回文结构，tRNAThr15909A>G突变后，产生限制性内切酶HpyCH4V识别的TGCA回文结构，快速酶切；(5)突变鉴定：将酶切后的产物进行凝胶电泳。
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