[发明专利]发色团修饰的脱氧核苷亚磷酰胺单体化合物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了发色团修饰的脱氧核苷亚磷酰胺单体化合物及其制备方法和应用。本发明将芘、苝或萘酰胺等发色团与双二异丙基氨基氯化磷相连接得到亚磷中间体，再与DMT保护的脱氧核苷反应，得到发色团修饰的脱氧核苷亚磷酰胺单体化合物。通过DNA的固相合成，将其定点插入到寡聚核苷酸中得到发色团修饰的双链结构稳定的荧光寡聚核苷酸探针。该荧光寡聚核苷酸探针本身没有荧光发射，只有和完全配对的靶链结合后，荧光增强可达23.5倍且响应速度快；对于错配碱基识别明显，几乎没有荧光发射，可以明显区分出单碱基错配，能应用于基因单碱基突变分析和PCR反应过程检测等，在单碱基多态性检测和生化样品中核酸检测等方面中应用前景广泛。

主权项

1.一种制备发色团修饰的脱氧核苷亚磷酰胺单体化合物的方法，其特征在于，所述发色团修饰的脱氧核苷亚磷酰胺单体化合物为式Ⅰ所示结构的化合物：其中，所述Base选自胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤或腺嘌呤；R1选自芘，苝或萘酰胺；DMTr为对二甲氧基三苯甲基；当R1为芘时，R2为异丙基；R3为异丙基；n为1；当R1为苝时，R2为异丙基；R3异丙基；n为3；当R1为萘酰胺时，R2为异丙基；R3为异丙基；n为2；其制备方法，包括：(1)在无水、无氧环境和氮气保护下，将芘甲醇与双二异丙基氨基氯化磷反应，得到芘修饰的亚磷中间体；(2)在无水、无氧环境、氮气保护和催化剂存在的条件下，将芘修饰的亚磷中间体和DMT保护的脱氧核苷反应，得到芘修饰的脱氧核苷亚磷酰胺单体化合物；或者：(1)在无水、无氧环境和氮气保护下，将苝丙醇与双二异丙基氨基氯化磷反应，得到苝修饰的亚磷中间体；(2)在无水、无氧环境、氮气保护和催化剂存在的条件下，将苝修饰的亚磷中间体和DMT保护的脱氧核苷反应，得到苝修饰的脱氧核苷亚磷酰胺单体化合物；或者：(1)在无水、无氧环境和氮气保护下，将N，N‑二甲胺基萘酰胺基乙醇与双二异丙基氨基氯化磷反应，得到萘酰胺修饰的亚磷中间体；(2)在无水、无氧环境、氮气保护和催化剂存在的条件下，将萘酰胺修饰的亚磷中间体和DMT保护的脱氧核苷反应，得到萘酰胺修饰的脱氧核苷亚磷酰胺单体化合物；所述催化剂为四氮唑；所述萘酰胺的结构式为