[发明专利]利用CRISPR/Cas9系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的系统及其应用有效
| 申请号： | 201510854747.8 | 申请日： | 2015-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN106811479B | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 夏兰琴;孙永伟;赵云德;马有志;吴传银;张欣 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院作物科学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/60;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;任凤华 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了利用CRISPR/Cas9系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的系统及其应用。本发明的用于植物基因组定点修饰的系统，含有用于植物基因组定点修饰的载体和供体DNA；所述用于植物基因组定点修饰的载体含有Cas9蛋白表达盒、gRNA表达盒和供体DNA；所述gRNA表达盒编码两种gRNA，所述两种gRNA分别靶向于目的植物的靶DNA的两个靶位点；所述靶DNA中待定点修饰片段位于所述两个靶位点之间。利用本发明的系统定点修饰ALS基因获得抗除草剂水稻的技术体系，无脱靶效应，为在水稻和其它作物中利用此系统进行基因的定点修饰提供了依据，为改良其它重要农作物的农艺性状提供基础。 | ||
| 搜索关键词： | 修饰 植物基因组 抗除草剂 水稻 供体DNA 靶位点 表达盒 靶DNA 蛋白表达盒 重要农作物 技术体系 目的植物 农艺性状 此系统 靶向 应用 改良 基因 | ||
【主权项】：
1.用于植物基因组定点修饰的载体组合物，含有用于植物基因组定点修饰的载体和供体DNA；所述用于植物基因组定点修饰的载体含有Cas9蛋白表达盒、gRNA表达盒和供体DNA；所述gRNA表达盒编码两种gRNA，所述两种gRNA分别靶向于目的植物的靶DNA的两个靶位点；所述靶DNA中待定点修饰片段位于所述两个靶位点之间；所述两个靶位点中位于上游的靶位点为上游靶位点，位于下游的靶位点为下游靶位点；所述供体DNA含有所述上游靶位点、所述下游靶位点和位于所述上游靶位点和所述下游靶位点之间的定点修饰片段；所述定点修饰片段为要替换所述待定点修饰片段的DNA片段；所述上游靶位点为SEQ ID No.1的第7590‑7609位所示的DNA片段；所述下游靶位点为SEQ ID No.1的第8032‑8051位所示的DNA片段；所述定点修饰片段为SEQ ID No.1的第7716‑7979位所示的DNA片段；所述gRNA表达盒包括gRNA表达盒1和gRNA表达盒2，所述gRNA表达盒1编码gRNA1，所述gRNA表达盒2编码gRNA2，所述gRNA1靶向于所述上游靶位点，所述gRNA2靶向于所述下游靶位点。
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