[发明专利]一种荧光定量PCR技术筛选耐渍涝花生品种或植株的方法在审

专利信息
申请号: 201510869503.7 申请日: 2015-12-02
公开(公告)号: CN105256066A 公开(公告)日: 2016-01-20
发明(设计)人: 李春娟;张廷婷;单世华;李林;周西 申请(专利权)人: 山东省花生研究所
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 266000 山东*** 国省代码: 山东;37
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摘要: 发明公开了一种荧光定量PCR技术筛选耐渍涝花生品种或植株的方法,其包括培养花生幼苗、胁迫处理与样品采集、花生AhGLB序列的应用、筛选等步骤。本发明方法操作简便,不需要模拟自然渍涝条件和各种农艺性状及生理生化指标的检测,周期短,成本低,科学准确,通用性好。
搜索关键词: 一种 荧光 定量 pcr 技术 筛选 耐渍涝 花生 品种 植株 方法
【主权项】:
一种荧光定量PCR技术筛选耐渍涝花生品种或植株的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)培养花生幼苗:选取生长力旺盛的花生种子,用质量分数为65%‑85%的乙醇消毒1‑5分钟后用质量分数0.1%的HgCl2溶液消毒5‑15分钟,再用无菌dH2O冲洗3‑4次,置于带有双层滤纸的培养皿中,每个培养皿加dH2O 20‑50mL,花生种子5‑15粒,25℃人工气候箱中暗培养20‑30h后,设置光照强度1000‑2000LX,每天光照培养12‑16h,培养72h;2)胁迫处理与样品采集:花生幼苗培养10‑20天后分为两组,其中一组进行通气处理的为对照组,另一组进行低氧胁迫处理20‑30h,分别提取对照组与低氧胁迫处理组花生幼苗根的RNA,反转录为cDNA,置于‑80‑‑70℃冰箱中保存备用;3)花生AhGLB序列的应用:对基因进行引物设计,以恒定表达基因Actin作为内参基因对同一样品cDNA模板利用荧光定量PCR仪进行定量分析,引物设计如下:AhGLB‑F:5’‑TGGAGGCAACAGCATTCACT‑3’;AhGLB‑R:5’‑ATGCTTCCTTCATGGCTGGT‑3’;Actin‑F:5’‑GTCCATCAGGCAACTCGTAGC‑3’;Actin‑R:5’‑GCCCTCGACTATGAGCAAGAG‑3’;使用荧光定量PCR仪进行检测,结束后利荧光定量PCR仪自带的SDS 2.0版软件进行结果分析;4)筛选分析。
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