[发明专利]一种体外肝间质细胞的分离方法在审
| 申请号： | 201510899041.3 | 申请日： | 2015-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN105420181A | 公开（公告）日： | 2016-03-23 |
| 发明（设计）人： | 刘思德;庄康敏;罗晓蓓;李爱民;余严军;张菊嫦;孟琰 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学南方医院 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司 44104 | 代理人： | 宣国华 |
| 地址： | 510515 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体外肝间质细胞的分离方法，包括以下步骤：（1）采用多点穿刺灌流法，在正常肝组织表面进行多点穿刺，将前灌流液及消化液依次灌注入正常肝组织标本中；（2）步骤（1）处理后所得的肝组织标本经过充分消化、初步过滤、重悬再过滤、取得间充质细胞后，得到原代肝间质细胞；（3）将步骤（2）培养得到的肝间质细胞进行扩增传代，获得肝间质细胞群。本发明的方法能够快速获得大量高纯度且具有增殖分化能力的肝间质细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 体外 间质 细胞 分离 方法 | ||
【主权项】：
一种体外肝间质细胞的分离方法，其特征在于包括以下步骤：（1）采用多点穿刺灌流法，在正常肝组织表面进行多点穿刺，将前灌流液及消化液依次灌注入正常肝组织标本中；（2）步骤（1）处理后所得的肝组织标本经过充分消化、初步过滤、重悬再过滤、取得间充质细胞后，得到原代肝间质细胞；（3）将步骤（2）培养得到的肝间质细胞进行扩增传代，获得肝间质细胞群；所述的步骤（3）中所述的充分消化、初步过滤、重悬再过滤、取得间充质细胞包括以下具体步骤：充分消化：将步骤（2）所得的充分灌注后的肝组织切碎后，在37℃摇床中以 30~50rpm/s的转速摇晃20~30min；用于充分消化肝组织碎片间的胶原纤维，以释放出肝脏间间充质细胞；初步过滤：将充分消化步骤后所得的液体经100目过滤网过滤，收集滤液，并将所得的滤液50g离心5min；用于充分过滤掉未能充分消化掉的肝组织碎片；重悬再过滤：收集初步过滤步骤中离心后所得的沉淀，并将其重悬；使用200目滤网过滤；50g离心5min；用于去除第一次离心后可能剩余的纤维组织，保证细所得到的胞的纯度；获得间间充质细胞：取离心后的上清液，50g离心5min，取沉淀。
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