[发明专利]一种猪极小胚胎样干细胞分离与纯化方法在审
| 申请号： | 201510909419.3 | 申请日： | 2015-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN105505858A | 公开（公告）日： | 2016-04-20 |
| 发明（设计）人： | 顾翔;李碧春;顾健;孙加斌;金凯;蒋一秀;罗雪;朱业;孙磊;胡茂志;石青青;朱睿;王竟悟;顾艺荀;苗书航 | 申请（专利权）人： | 江苏省苏北人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/074 | 分类号： | C12N5/074 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 225001 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速有效的极小胚胎样干细胞(very small embryonic-like stem cells，VSELs)分离和纯化方法，包括以下步骤 ：1. 猪骨髓液红细胞裂解后经含FBS的RPMI 1640培养基重悬细胞分离出猪骨髓总单个核细胞；2. 加入FcR封闭液，耦合CD133抗体或Lin抗体的免疫磁珠，过柱分选，获得猪骨髓CD133（+）或Lin（-）细胞群；3. 采用CD133、CD45、Lin抗体标记流式细胞分选术获得猪骨髓CD133 (+) Lin (-) CD45 (-)极小胚胎样干细胞。本发明具有高效率、高纯度、高度稳定等优势，是首次分离、纯化出偶蹄类动物猪的VSELs，丰富了现有的干细胞库，有利于对大型偶蹄动物VSELs进一步研究，使VSELs更接近于临床应用。 | ||
| 搜索关键词： | 种猪 极小 胚胎 干细胞 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种猪极小胚胎样干细胞的分离与纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）猪骨髓液红细胞裂解后经含FBS的RPMI 1640培养基重悬细胞分离出猪骨髓总单个核细胞；（2）按照1×108/100ul细胞浓度加入FcR封闭液，耦合CD133抗体或Lin抗体的免疫磁珠，过柱分选，获得猪骨髓CD133（+）或Lin（‑）细胞群；（3）采用CD133、CD45、Lin抗体标记的流式细胞分选术获得猪骨髓CD133 (+) Lin (‑) CD45 (‑)极小胚胎样干细胞。
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