[发明专利]CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法在审
| 申请号： | 201510927246.8 | 申请日： | 2015-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN105368957A | 公开（公告）日： | 2016-03-02 |
| 发明（设计）人： | 张朗;董烨平;李娟;乔君华;蔡洁行;周伟昌;陈智胜 | 申请（专利权）人： | 无锡药明康德生物技术股份有限公司;上海药明生物技术有限公司;天津药明康德新药开发有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 丁纪铁 |
| 地址： | 214092 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法，步骤包括：1)提取CHO细胞基因组DNA；2)用限制性内切酶对基因组DNA进行酶切处理；3)进行微滴数字PCR反应；4)PCR反应结束后，测定PCR反应板每孔样品的阳性微滴、阴性微滴数目，获得CHO细胞的基因拷贝数。本发明还公开了用于上述方法的引物和探针。本发明通过选择合适的参照基因、设计合适的引物和荧光标记探针、优化CHO细胞基因组模板上样量、选择合适的限制性内切酶对基因组模板进行酶切处理、评估不同的基因组提取试剂盒对ddPCR检测结果的影响，提高了CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR绝对定量检测的灵敏度和精确度。 | ||
| 搜索关键词： | cho 细胞 基因 拷贝 数字 pcr 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
CHO细胞基因拷贝数的微滴数字PCR定量检测方法，其特征在于，步骤包括：1)提取CHO细胞基因组DNA；2)用限制性内切酶对步骤1)提取的基因组DNA进行酶切处理；3)进行微滴数字PCR反应；4)PCR反应结束后，测定PCR反应板每孔样品的阳性微滴、阴性微滴数目，获得CHO细胞的基因拷贝数。
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