[发明专利]一种纳米羟基磷灰石-siRNA复合物及其制备方法

摘要

本发明公开了一种纳米羟基磷灰石‑siRNA复合物及其制备方法，属于生物材料技术制备领域。本发明复合物由纳米羟基磷灰石和siRNA组成。纳米羟基磷灰石为球形，直径约20～50nm，粒径分布均匀。该复合物制备工艺简单，可重复性高，生物相容性好，转染效率可达15.4％，能显著促进细胞凋亡，可应用于药物、基因载体及组织工程等相关领域的研究。

主权项

1.纳米羟基磷灰石‑siRNA复合物，其特征在于所述复合物是由纳米羟基磷灰石和siRNA组成，所述纳米羟基磷灰石为球形，分散性良好，直径为20～50 nm；纳米羟基磷灰石表层由聚乙烯亚胺覆盖，Zeta电位为+13.22±0.5 mV；所述的siRNA的靶向基因为ras癌基因家族、sis癌基因家族、myc癌基因家族中的一种；其制备方法包括以下步骤：1）在15～35 ℃的反应温度下，将等体积磷酸盐溶液滴加到钙盐溶液中，以200～400 rpm的速度均匀搅拌，利用浓氨水调节pH至10～13，滴加完成后持续搅拌0.5～2 h；2）在上述反应体系中缓慢滴加聚乙二醇溶液，其滴加量为钙盐体积的0.005～0.01倍，滴加完成后持续搅拌3～6 h，搅拌速度为200～400 rpm，维持反应体系的pH=10～13；3）在上述反应体系中缓慢滴加聚乙烯亚胺溶液，其滴加量为钙盐体积的0.005～0.01倍，滴加完成后持续搅拌2～12 h，搅拌速度为200～400 rpm，维持反应体系的pH=10～13；4）反应完成后，8000～15000 rpm离心3～5 min，分离沉淀，将沉淀分别用去离子水、无水乙醇超声清洗3次，然后将清洗后样品置于37 ℃～70 ℃烘箱干燥，得到羟基磷灰石纳米颗粒；5）将步骤4）得到的羟基磷灰石纳米颗粒紫外灭菌0～24 h后以DEPC水重悬、超声，得到羟基磷灰石悬液；6）将步骤5）得到的羟基磷灰石悬液与siRNA按质量比1: 1～20: 1进行混合并吹打，20℃静置5～30 min，即得到纳米羟基磷灰石‑siRNA复合物。