[发明专利]一种防治鸡球虫病的CHP317基因、疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫基因，该基因为Et CHP317基因，包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。同时提供一种防治鸡球虫病的疫苗的制备方法：将柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et CHP317的成熟肽与大肠杆菌或毕赤酵母细胞的表达载体相连获重组表达载体，再将重组表达载体转入大肠杆菌或毕赤酵母细胞宿主获得重组菌株，培养该重组菌株，即得防治鸡球虫病的疫苗，具有很高的应用价值。

主权项

1.一种制备预防鸡球虫病的疫苗或药物的方法，所述方法为：将测序正确的重组克隆质粒pGEM‑T‑Et CHP317，利用限制性内切酶BamH I和Xho I进行双酶切，然后再与用同样限制性内切酶双酶切的原核表达载体pET‑28a连接，构建重组表达质粒pET‑Et CHP317；将构建成功的pET‑Et CHP317重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，接种于至含5％(质量比)葡萄糖和0.2％(质量比)谷胺酰胺的LB培养基中，37℃，180rpm振荡培养至细胞密度为109cfu/ml，取20mL IPTG诱导上述菌液，4℃离心获得菌体沉淀后，加入适量PBS缓冲液，悬浮均匀，离心；或者为，将鉴定正确的重组质粒pGEM‑T‑Et CHP317和真核表达载体pcDNA3.1‑flag分别用BamH I和Hind 3进行双酶切，电泳后将Et CHP317目的条带和酶切的pcDNA3.1‑flag载体分别进行胶回收，然后4℃连接过夜，将连接产物转化到大肠杆菌Top10感受态细胞中，构建重组表达质粒pcDNA3.1‑flag‑Et CHP 317；将构建成功的pcDNA3.1‑flag‑Et CHP 317重组表达质粒，转化毕赤酵母细胞，接种于至含5％(质量比)葡萄糖和0.2％(质量比)谷胺酰胺的YPD培养基中，37℃，180rpm振荡培养至细胞密度为109cfu/ml，4℃离心获得菌体沉淀后，加入适量PBS缓冲液，悬浮均匀，离心；其中，Et CHP317基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。