[发明专利]一种大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化方法在审
| 申请号： | 201510954586.X | 申请日： | 2015-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN105420157A | 公开（公告）日： | 2016-03-23 |
| 发明（设计）人： | 赵大显;张小君;陈娟;程海艳 | 申请（专利权）人： | 深圳宏康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518100 广东省深圳市宝*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化方法，包括如下步骤：在SOB液体培养基中培养大肠杆菌，至OD600为0.4~0.6时加入缓冲液I，冰浴后离心收集细胞，缓冲液II重悬细胞后，分装到预冷的无菌离心管中，得到大肠杆菌感受态细胞。转化过程中，DNA与感受态细胞混匀，热击后直接涂布于培养基上，而无需冰浴和复苏步骤。本发明采用特殊配方的缓冲液制备大肠杆菌感受态细胞，其转化效率可达1.23×109 cfu/µg pUC19 DNA。该方法操作简单、转化效率高，重复性好，简化了大肠杆菌感受态细胞的制备和DNA转化操作，为DNA的高效快速转化提供了技术基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大肠杆菌 感受态 细胞 制备 及其 转化 方法 | ||
【主权项】：
一种大肠杆菌感受态细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a）挑取新活化的大肠杆菌单菌落至2ml LB液体培养基中，30℃，200rpm振荡培养过夜；b）取500µl过夜培养物转接到50ml SOB液体培养基中，30℃，200rpm振荡培养至OD600值为0.4~0.6；c）将菌液转移到预冷的无菌离心管中，加入5ml预冷的缓冲液I，混匀，冰浴10min；d）于4℃以4000rpm离心5min收集细菌；e）用2ml预冷的缓冲液II重悬细菌，冰浴10min后，100µl/管分装，‑80℃保存，即得到大肠杆菌感受态细胞。
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