[发明专利]基于7-羟基香豆素的定点荧光标记方法有效
| 申请号： | 201510957190.0 | 申请日： | 2015-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN105541962B | 公开（公告）日： | 2021-04-02 |
| 发明（设计）人： | 张贯京;陈兴明;张少鹏;高伟明;李慧玲;潘延超 | 申请（专利权）人： | 深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/13 | 分类号： | C07K1/13 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518063 广东省深圳市前海深港合作区前*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于7‑羟基香豆素的定点荧光标记方法，通过合成M.Barkeri物种的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶(PylRS)的DNA序列，并将所述DNA序列连接到pBK质粒上；通过采用“饱和突变”的方法，构建了能够在原核和真核生物细胞中表达的M.Barkeri物种的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶突变库Lib‑CouKRS；通过合成用于定点荧光标记的7‑羟基香豆素赖氨酸，进行筛选和验证。本发明基于7‑羟基香豆素的定点荧光标记方法达到了基于7‑羟基香豆素在真核生物(哺乳动物细胞)中实现目的蛋白质的氨基酸序列的任意位点的荧光标记。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 羟基 香豆素 定点 荧光 标记 方法 | ||
【主权项】：
一种基于7‑羟基香豆素的定点荧光标记方法，其特征在于，所述基于7‑羟基香豆素的定点荧光标记方法包括如下步骤：S1：获得M.Barkeri PylRS突变库；S2：获得香豆素赖氨酸；S3：筛选特异识别7‑羟基香豆素的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶(CouKRS)突变体；S4：在鲸鱼肌红蛋白Myoglobin‑4TAG中插入7‑羟基香豆素赖氨酸，验证筛选得到的CouKRS能够实现在目的蛋白质制定位点插入。
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