[发明专利]小蝉草菌丝体及胞外多糖液体发酵的生产方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，公开了一种小蝉草菌丝体及胞外多糖液体发酵的生产方法。以一种小蝉草菌种为出发菌株，通过液体深层发酵，获得菌丝体和胞外多糖。斜面试管菌种于无菌条件下经研磨后，接入液体培养基中制备成液体菌种，再用于液体深层发酵，经过振荡培养或搅拌培养后，获得培养物，利用离心或过滤等方法分离菌丝体和培养液，可获得菌丝体（干重）5‑8 g/L。培养液经超滤或乙醇沉淀后获得胞外多糖，得率为0.5‑1.2g/L。利用以上工艺可进行小蝉草菌丝体和胞外多糖的生产，具有较高的开发价值。

主权项

一种小蝉草(Cordyceps sobolifera)菌丝体及胞外多糖的液体培养方法，其特征包括以下的步骤：第一步： 将小蝉草接种在PDA培养基上，20‑25^oC下进行暗培养，使菌落直径长至4‑6cm，得到斜面菌种；第二步：第一步得到的斜面菌种，在经灭菌的研钵里，加入适量无菌水进行研磨，接种至液体种培养基，20‑28^oC下振荡培养，培养7‑10天，至菌丝球充满全部培养基，得到液体菌种，所述的液体种培养基pH6.0‑6.5，每1000mL培养基中含有葡萄糖10‑20g, 蛋白胨1‑5g，牛肉浸膏1‑4g，酵母浸膏0.5‑1g；第三步：将第二步得到的液体菌种接种到液体培养基进行培养,所述的生产用液体培养基pH5.0‑8.5，每1000mL培养基中含有葡萄糖10‑20g, 蛋白胨1‑5g，牛肉浸膏1‑4g，酵母浸膏0.5‑1g，其余为水；第四步：第三步的液体培养可采用两种方式进行，一为振荡培养，另一为搅拌培养。振荡培养方式：将以上液体菌种（步骤2）按接种量5%‑15%（V/V）的比例，接种至液体培养基（同菌种液体培养基GPBY），100‑180r/min，培养4‑7天，至菌丝球充满全部培养基；搅拌培养方式为按比例接入适量的液体菌种后，利用磁力搅拌器进行培养，培养室温度设置为20‑28^oC下，培养时间4‑7天；第五步：将第四步中的培养物进行菌丝体和培养液的分离，采用离心法或过滤法收集菌丝，菌丝（湿重）得率为70‑100g/L；在40‑60^oC下烘干菌丝，菌丝（干重）产率5‑8 g/L；离心得的上清液或过滤得的滤液直接加入适量酒精进行多糖沉淀，或进行浓缩后再进行多糖沉淀，最后利用离心的方法收集多糖，多糖经40‑50^oC下烘干或冷冻干燥，得率为0.5‑1.2g/L。