[发明专利]一种经腺病毒基因修饰的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201510999658.2 | 申请日： | 2015-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN105602900A | 公开（公告）日： | 2016-05-25 |
| 发明（设计）人： | 张剑慧;王芝辉;武建明;谭毅;张慧慧 | 申请（专利权）人： | 山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 250000 山东省济南市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种淋巴细胞的培养方法，特别公开了一种经腺病毒基因修饰的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的培养方法。本发明取150-200mL脐血或自体外周血进行单个核细胞分离，贴壁2h分离培养DC细胞，未贴壁细胞于含IL-2的培养基中进行T淋巴细胞预养。DC细胞经iAPA因子腺病毒感染诱导成熟后，收集成熟DC，按照DC∶T为1∶10的效靶比刺激自体原初T淋巴细胞，使其分化为细胞毒性T淋巴细胞，观察记录CTL的增殖能力、检测CTL的细胞毒性。本发明能够解决血液成分单采机的限制，采集的血量少，减轻患者的负担，并且能够在体外观察iAPA-DC刺激原初T细胞分化为肿瘤特异性的细胞毒性T淋巴细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 基因 修饰 肿瘤 特异性 细胞 毒性 淋巴细胞 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种经腺病毒基因修饰的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的培养方法，以癌症患者的脐血或自体外周血为处理对象，其特征为，包括如下步骤：(1)从脐血或自体外周血中分离出单个核细胞，重悬于X‑VIVO15培养基中静置培养；(2)将培养单个核细胞的培养瓶晃动，分离贴壁细胞和未贴壁细胞，将贴壁细胞诱导为未成熟DC细胞；(3)将未成熟DC细胞通过iAPA腺病毒因子转染并诱导为成熟DC细胞；(4)将成熟DC细胞和T细胞混合共培养，连续刺激得到CTL细胞；(5)将经DC细胞激活的CTL细胞进行增殖培养。
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