[发明专利]一种副溶血弧菌氟喹诺酮类药物耐药基因检测方法在审
| 申请号： | 201511011330.1 | 申请日： | 2015-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN105567813A | 公开（公告）日： | 2016-05-11 |
| 发明（设计）人： | 黄升谋 | 申请（专利权）人： | 湖北文理学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 441053 湖北省襄樊市*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种副溶血弧菌氟喹诺酮类药物耐药基因检测方法，该方法包括如下步骤：（1）收集副溶血弧菌活菌体1.0~1.2g，用7~8mL去离子水重悬，反复冻融破碎细胞，离心后收集上清液，得到模板；（2）将该模板与氟喹诺酮类药物耐药基因检测引物GyrA-F、GyrA-R、GyrB-F、GyrB-R、ParE-F和ParE-R共同混合后，进行PCR扩增；（3）步骤（2）的PCR扩增结束后，进行琼脂糖凝胶电泳并送交测序。本发明的检测方法敏感、特异、快速，可以检测极微量的目的基因进行检测，而不需要经过费时的副溶血弧菌培养阶段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 溶血 弧菌 喹诺酮类 药物 耐药 基因 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种副溶血弧菌氟喹诺酮类药物耐药基因检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）收集副溶血弧菌活菌体1.0~1.2g，用7~8mL去离子水重悬，反复冻融破碎细胞，离心后收集上清液，得到模板；（2）将该模板与氟喹诺酮类药物耐药基因检测引物GyrA‑F、GyrA‑R、GyrB‑F、GyrB‑R、ParE‑F和ParE‑R共同混合后，进行PCR扩增，该PCR扩增的反应体系中包括超纯水、PCR缓冲液、终浓度均为0.3~0.5mmol/L的dNTP、终浓度为0.3~0.5mmol/L的GyrA‑F、终浓度为0.3~0.5mmol/L的GyrA‑R、终浓度为0.5~0.8mmol/L的GyrB‑F、终浓度为0.5~0.8mmol/L的GyrB‑R、终浓度为0.5~0.6mmol/L的ParE‑F、终浓度为0.5~0.6mmol/L的ParE‑R和终浓度为0.02~0.03U/uL的TaqDNA聚合酶，其中GyrA‑F、GyrA‑R、GyrB‑F、GyrB‑R、ParE‑F和ParE‑R分别如SEQ ID 1、SEQ ID 2、SEQ ID 3、SEQ ID 4、SEQ ID 5和SEQ ID 6，上述PCR缓冲液的10倍母液中包括10~20mM氯化钾、pH8.3的12mMTris‑HCl和0.01~0.02%氯化钠，20~30mM MgCl2；（3）步骤（2）的PCR扩增结束后，进行琼脂糖凝胶电泳并送交测序。
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