[发明专利]一种研究微生物间相互关系的透析袋分离培养法

摘要

一种研究不同种类微生物共同培养的方法，其特征是在无菌环境下将少量含不同种类微生物的培养基分别密封于特定孔径的透析袋，之后将上述密封后的透析袋浸泡于液体培养基中进行培养；此方法可以同时培养多种微生物，不影响各种细菌与培养基中的营养物质和细菌代谢物质交换；培养结束后无菌环境下取出透析袋内含细菌的培养基进行活菌计数后可准确计算各细菌生长数量，进而研究不同微生物之间的拮抗或共生作用，此外，此方法可通过选择不同孔径透析袋进而控制细菌进出透析袋的蛋白，研究不同大小细菌蛋白对其他细菌的生理作用。该方法能够同时研究多种微生物之间的相互作用，简单、快捷。

主权项

一种研究不同种类微生物共同培养的方法，其特征是:（1）pH值检测a 量取去离子无菌水约50 ml，加入浓盐酸，用pH调节计配制pH=4的溶液；b 取200 ml去离子无菌水放入烧杯A1，同时加入5 ml上述pH=4的溶液，用PH计检测烧杯A1内pH；依次取5ml上述pH=4的溶液分别加入到5kd、10kd、25kd、1000kd透析袋内并用透析袋夹将其两头密封，将透析袋分别置于200ml去离子无菌水的烧杯B1、C1、D1、E1内，用pH计检测上述四只烧杯内pH值，记录B1、C1、D1、E1烧杯内PH值达到A1烧杯pH的时间，记为时间T₁；（2）葡萄糖检测a 用去离子无菌水配制浓度为25%的葡萄糖溶液50mlb 取200ml去离子无菌水加入烧杯A2，同时加入5ml上述浓度为25%的葡萄糖溶液，用葡萄糖试剂盒检测并记录烧杯内葡萄糖浓度；依次取5ml上述浓度为25%的葡萄糖溶液分别加入5kd、10kd、25kd、1000kd透析袋内，将透析袋分别放入盛有200ml去离子无菌水的烧杯B2、C2、D2、E2内，用葡萄糖试剂盒检测烧杯B2、C2、D2、E2内葡萄糖浓度，记录B2、C2、D2、E2烧杯内葡萄糖浓度达到A2烧杯葡萄糖浓度一致的时间，记为时间T₂；（3） BSA牛血清蛋白检测a 用无菌PBS配制浓度为2%的牛血清蛋白溶液50mlb 取200ml PBS加入烧杯A3，同时加入5ml上述浓度为2%的牛血清蛋白溶液，检测并记录烧杯A3内牛血清蛋白溶液浓度；取5ml上述浓度为2%的牛血清蛋白溶液分别加入5kd、10kd、25kd、1000kd透析袋内，将透析袋分别放入盛有200ml无菌PBS的烧杯B3、C3、D3、E3内，检测烧杯B3、C3、D3、E3内牛血清蛋白浓度，记录B3、C3、D3、E3烧杯内牛血清蛋白浓度达到A3烧杯牛血清蛋白浓度一致的时间，记为时间T₃；（4） 通过对时间T₁、T₂、T₃的统计，确定细菌共培养最佳培养时间为T₄，最佳透析袋孔径为1000kd；(5) 根据步骤（4）结果，将不同种类微生物转移至1000kd透析袋中，置于相同培养基中培养24小时后，无菌取出各透析袋中含有细菌的培养基，活菌计数确定各透析袋中微生物数量，进而确定不同微生物之间的相互促进或拮抗作用；（6） 根据步骤（1）、（2）、（3）中得到的结果，将不同种类微生物分别置于5kd、10kd、25kd、1000kd透析袋中，相同孔径的透析袋置于相同培养基中培养24小时后，无菌取出各透析袋中含有细菌的培养基，活菌计数确定各透析袋中微生物数量，进而确定不同孔径蛋白对微生物之间的相互促进或拮抗作用。