[发明专利]一种测定rhCNB含量的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种测定rhCNB含量的方法。本发明对含有rhCNB的多组分样品进行还原，得到单一rhCNB单体的样本。再采用高效液相和凝胶色谱柱进行测定，既排除了各种无机盐和含氮小分子又排除了杂蛋白、核酸等大分子的干扰，得到单一的目标峰。该方法专属性好、抗干扰性强、结果准确、重复性高。为验证该方法的专属性、抗干扰性、准确性以及重复性，在实施例中对样品加入各种类型的干扰物质(TRIS、EGTA、Ca2+、枸橼酸盐缓冲液、小分子盐类及氨基酸)，均取得良好结果。本发明相较凯氏定氮法、Lowry法(福林酚法)、双缩脲法等经典方法，本法具有专属性好、准确度高、简便易行等优点。

主权项

一种测定rhCNB含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：取rhCNB粗品，与还原剂混合发生还原反应，制得供试品溶液；步骤2：取所述供试品溶液、已经标定的rhCNB对照品分别经高效液相色谱测定，按照外标法以峰面积获得rhCNB的含量；所述还原剂为还原型DTT、还原型谷胱苷肽、β‑巯基乙醇、硼氢化钠或亚硫酸氢钠中的一种或两者以上的混合物；所述还原反应的反应温度为80℃～100℃，所述还原反应的反应时间为15～60min；所述还原剂的使用量至少为所述rhCNB粗品的蛋白量的1％(w/w)；所述高效液相色谱采用凝胶柱，以含异丙醇的磷酸盐缓冲液pH7.0溶液为液动相；所述流动相的流速为0.7mL/min；所述高效液相色谱的检测波长为280nm；以g/mol计，所述rhCNB粗品与所述还原剂的质量摩尔比为6:0.08。