[发明专利]一种I-IV型登革热病毒的通用检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种I-IV型登革热病毒的通用检测试剂盒，属于病毒检测技术领域。该试剂盒包括酶标记板、阴性对照血清、阳性对照NS1重组蛋白、检测抗体、显色底物和终止液。所述酶标记板上的包被抗体为DV14抗体，检测抗体为连接了生物素的DV11抗体。所述的阴性对照血清为没有感染登革热病毒的正常人的血清，终止液为2M的硫酸，显色底物包括酶标亲和素抗体和TMB显色液。本发明除了能快速的对早期登革热进行诊断，它还具有很高的专一性，与乙脑病毒并无交叉反应，对登革病毒具有良好的识别能力。本发明可使得四种不同型别特异性的单克隆抗体一次产生，缩短了至少4倍的时间和后续的成本。

主权项

一种I‑IV型登革热病毒的通用检测试剂盒，其特征在于，包括酶标记板、阴性对照血清、阳性对照重组蛋白、检测抗体、显色底物和终止液；所述酶标记板上的包被抗体为DV14抗体，所述的DV14抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述的阴性对照血清为没有感染登革热病毒的正常人的血清；所述的阳性对照重组蛋白包括四种型别的NS1重组蛋白；所述的四种型别的NS1重组蛋白的制备方法均是将登革病毒标准株经RT‑PCR扩增后，与pMD19T载体连接，连接产物与pET30a经BamH I和Not I双酶切后，胶回收，T4 DNA连接酶连接回收产物，然后再转到大肠杆菌BL‑21中，通过表达纯化，得到相应型别的NS1重组蛋白；所述的登革病毒标准株包括I‑IV型登革病毒标准株；所述的检测抗体为连接了生物素的DV11抗体，所述的DV11抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.2；所述的显色底物包括酶标亲和素抗体和TMB显色液；所述的酶标亲和素抗体为HRP标记的羊抗小鼠二抗；所述的终止液为2M的硫酸。