[发明专利]一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法有效
| 申请号： | 201511025413.6 | 申请日： | 2015-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN105524940B | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 张涌;刘鑫;苏建民;高明清;王勇胜;孙洪政 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学;杨凌科元克隆股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/873 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法。本发明提供的载体包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因。将阳性转染的细胞作为供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚培养至36h时，诱导表达牛KDM4B和KDM4C。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 组蛋白 甲基化 水平 修饰 提高 克隆 效率 载体 细胞 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体，其特征在于，包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因；牛KDM4B的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；牛KDM4C基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；所述的阻遏物表达载体为能够表达四环素阻遏蛋白的TetR的载体；所述的含有阻遏操纵子的表达载体为含有四环素操纵基因TetO的载体，其中插入携有荧光标记的牛KDM4B或KDM4C基因的读码框；在牛KDM4B或KDM4C基因末端添加Kozak序列、EGFP标签和酶切位点。
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