[发明专利]一种基于荧光共振能量转移方法检测Rab蛋白与其效应因子间相互作用的方法

摘要

本发明属于生物科学技术领域，具体的说是基于荧光共振能量转移方法检测Rab蛋白与其效应因子间相互作用的方法。通过天然GTP的荧光类似物mantGTP置换与Rab蛋白结合的GDP，作为荧光共振能量转移的供体；构建Rab蛋白的效应因子与绿色荧光蛋白GFP融合表达的载体，融合蛋白经过表达纯化之后作为荧光共振能量转移的受体；可以利用荧光光谱仪基于荧光共振能量转移的方法在体外直接检测以mantGTP形式结合的Rab蛋白和与绿色荧光蛋白GFP融合表达的效应因子之间的相互作用。本发明提供了一种灵敏快捷的检测Rab蛋白与其效应因子相互作用的新方法，完善了蛋白质相互作用的体系。

主权项

1.一种基于荧光共振能量转移方法检测Rab蛋白与其效应因子间相互作用的方法，其特征在于：以天然GTP的荧光类似物mantGTP置换与Rab蛋白结合的GDP，作为荧光共振能量转移的供体；构建Rab蛋白的效应因子与绿色荧光蛋白GFP融合表达的载体，融合蛋白经过表达纯化作为荧光共振能量转移的受体，而后在体外根据荧光共振能量转移方法直接检测以mantGTP形式结合的Rab蛋白和与绿色荧光蛋白GFP融合表达的效应因子之间的相互作用；具体为1)构建绿色荧光蛋白(GFP)与载体融合表达，得带有GFP的融合表达载体；2)扩增效应因子，并将扩增效应因子连接到上述带有GFP标签的融合表达载体上，形成效应因子与GFP的重组载体；3)将效应因子与GFP的重组载体与Rab蛋白分别进行表达和纯化；而后利用GTP的荧光类似物mantGTP置换与Rab蛋白紧密结合的GDP；4)基于荧光共振能量转移检测Rab蛋白与效应因子之间的相互作用。