[发明专利]一种依诺肝素钠的检测方法

摘要

本发明公开了一种依诺肝素钠的检测方法，它包括以下步骤a、取依诺肝素钠样品，水解，得到水解溶液；b、取水解溶液，衍生化，得到待检溶液；c、采用高效液相色谱方法对待检溶液进行检测，检测得到葡萄糖胺与甘露糖胺的峰面积，计算得到葡萄糖胺与甘露糖胺的比例。本发明检测方法，通过检测葡萄糖胺与甘露糖胺的比例，不仅可以直观的反映出产品质量和/或其生产工艺的稳定性；而且，本发明检测方法简便，无需采用复杂的梯度洗脱程序，就可以实现对依诺肝素钠的准确检测，为监控依诺肝素钠的产品质量和/或其生产工艺的稳定性提供了一种简单易行的新方法。

主权项

一种依诺肝素钠的检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：a、取依诺肝素钠样品，加入酸水溶液，于110℃～120℃下水解反应6～8小时后，除去酸，加入水，过滤，得到样品水解溶液，所述的酸水溶液的浓度为1.5～2.5mol/L；所述的酸水溶液为三氟乙酸水溶液或氢氟酸；其中，依诺肝素钠样品与酸水溶液的重量体积比为1：0.5～2 mg/mL，依诺肝素钠样品与水的重量体积比为1：80～100 mg/μL；b、取样品水解溶液，加入氢氧化钠水溶液和衍生化试剂醇溶液，于70℃～80℃下反应60分钟～90分钟后，冷却，用盐酸调节至溶液呈中性，加入三氯甲烷，振荡，离心，取水相的上清液，作为待检溶液；其中，样品水解溶液与氢氧化钠水溶液的体积比为1：0.8～1.5；样品水解溶液与衍生化试剂醇溶液的体积比为1：0.8～1.5；所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.2 mol/L～0.5mol/L，所述衍生化试剂醇溶液的浓度为0.2 mol/L～1mol/L；所述的衍生化试剂醇溶液为1‑苯基‑3甲基‑5‑吡唑啉酮的甲醇溶液；c、采用高效液相色谱方法对待检溶液进行检测，检测条件如下：反相色谱柱：Agilent Eclipse XDB‑C18柱，长度为150mm，内径为4.6mm，填料的粒径为5µm；流动相：磷酸盐缓冲液‑乙腈，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为85:15；检测波长为245 nm；柱温为30℃；流速为1mL/min；进样体积为20μL；检测得到葡萄糖胺与甘露糖胺的峰面积，按照以下公式：，计算得到葡萄糖胺与甘露糖胺的比例；所述的磷酸盐缓冲液是按照以下方法配制而成：取0.05～0.2mol/L的磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH值为6.7，即得。