[发明专利]基于Gβγ互作蛋白监测G蛋白激活的生物传感器

摘要

描述了用于评估G蛋白活性的基于共振能量转移(RET)或蛋白片段互补测定的生物传感器。这些生物传感器基于Gα亚基和Gβγ互作蛋白之间竞争结合于Gβγ二聚体。这些生物传感器包括：与适当的RET或PCA标记融合的(1)βγIP和(2)Gβ或Gγ蛋白；GPCR；或质膜靶向域。还描述了使用这样的传感器用于不同的应用的方法，所述应用包括对调节G蛋白活性的试剂的鉴别或对GPCR信号传导/调节的表征的鉴别如GPCR的G蛋白偏好和激活谱。

主权项

一种用于检测G蛋白活性的生物传感器系统，所述生物传感器系统包括(A)或(B)中定义的元件：(A)(i)第一生物传感器，其包括：第一组件，其包括融合于(a)共振能量转移(RET)供体；(b)RET受体或(c)报告蛋白的第一片段的Gβγ互作蛋白(βγIP)；和第二组件，其包括融合的Gβ蛋白或融合的Gγ蛋白，其中所述Gβ蛋白或所述Gγ蛋白融合于(a)RET供体；(b)RET受体或(c)所述报告蛋白的第二片段；(ii)第二生物传感器，其包括：(i)中定义的第一组件和第二组件；和包括重组Gα蛋白的第三组件；其中，(a)如果所述βγIP融合于所述RET供体，则所述Gβ或Gγ蛋白融合于所述RET受体；(b)如果所述βγIP融合于所述RET受体，则所述Gβ或Gγ蛋白融合于所述RET供体；以及(c)如果所述βγIP融合于所述报告蛋白的第一片段，则所述Gβ或Gγ蛋白融合于所述报告蛋白的第二片段；或(B)(i)生物传感器，其包括第一组件，其包括融合于(a)RET供体；(b)RET受体或(c)报告蛋白的第一片段的Gβγ互作蛋白(βγIP)；第二组件，其包括融合的G蛋白偶联受体(GPCR)，其中所述GPCR在其C端融合于(a)RET供体；(b)RET受体或(c)所述报告蛋白的第二片段；第三组件，其包括重组Gα蛋白；其中，(a)如果所述βγIP融合于所述RET供体，则所述GPCR融合于所述RET受体；(b)如果所述βγIP融合于所述RET受体，则所述GPCR融合于所述RET供体；以及(c)如果所述βγIP融合于所述报告蛋白的第一片段，则所述GPCR融合于所述报告蛋白的第二片段。