[发明专利]用于测定神经毒素多肽的生物活性的方法有效
| 申请号： | 201580062143.8 | 申请日： | 2015-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN107003310B | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 卡尔-海因茨·艾泽勒 | 申请（专利权）人： | 莫茨药物股份两合公司 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;C07K19/00 |
| 代理公司： | 北京柏杉松知识产权代理事务所(普通合伙) 11413 | 代理人： | 王庆艳;刘继富 |
| 地址： | 德国法*** | 国省代码： | 德国;DE |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用于测定神经毒素的生物活性的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在神经毒素敏感细胞中表达融合蛋白，所述融合蛋白包含(i)锚定蛋白，(ii)报告蛋白和(iii)插入所述锚定蛋白与所述报告蛋白之间的神经毒素切割位点；(b)将(a)的神经毒素敏感细胞与神经毒素一起温育并在允许所述神经毒素发挥其生物活性的条件下培养所述细胞；(c)将(b)的神经毒素敏感细胞在允许从透化的神经毒素敏感细胞释放所述报告蛋白但不释放所述锚定蛋白的条件下透化；和(d)量化从所述细胞释放的所述报告蛋白的活性，从而确定所述神经毒素的生物活性。此外，本发明涉及一种融合蛋白，其包含(i)锚定蛋白，(ii)报告蛋白，和(iii)插入所述锚定蛋白与所述报告蛋白之间的神经毒素切割位点，用于测定神经毒素在神经毒素敏感细胞中的生物活性。本发明还涵盖一种包含本发明的融合蛋白的试剂盒。最后，本发明涉及本发明的融合蛋白用于测定神经毒素在神经毒素敏感细胞中的生物活性的用途。 | ||
| 搜索关键词： | 神经毒素 敏感细胞 生物活性 锚定蛋白 融合蛋白 蛋白 切割位点 透化 神经毒素多肽 细胞释放 试剂盒 释放 温育 量化 涵盖 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种用于测定神经毒素的生物活性的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在神经毒素敏感细胞中表达融合蛋白，所述融合蛋白包含(i)锚定蛋白，(ii)报告蛋白和(iii)插入所述锚定蛋白与所述报告蛋白之间的神经毒素切割位点；其中，所述锚定蛋白是稳定地附着于或整合到质膜中并与神经毒素敏感细胞的细胞溶质接触的多肽，并且所述锚定蛋白选自膜蛋白、跨膜蛋白或整合膜蛋白、或膜相关蛋白；(b)将(a)的神经毒素敏感细胞与神经毒素一起温育并在允许所述神经毒素发挥其生物活性的条件下培养所述神经毒素敏感细胞；(c)将(b)的神经毒素敏感细胞在允许从透化的神经毒素敏感细胞释放所述报告蛋白但不释放所述锚定蛋白的条件下透化；和(d)量化从(c)的透化的神经毒素敏感细胞释放的所述报告蛋白的活性，从而确定所述神经毒素的生物活性。
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