[发明专利]实时检测活体藻细胞油脂含量的荧光分光光度法

摘要

一种实时检测活体藻细胞油脂含量的荧光分光光度法，属于微藻株油脂含量的快速筛选方法。藻细胞油脂含量的荧光分光光度法：不同种属和不同形态的微藻其结构和形状存在的差异，针对所述的微藻进行实验、测定，不同种属和不同形态的微藻所需的染色条件有所不同，包括有藻细胞溶液浓度的选择，荧光染色剂剂量的选定，染色过程的环境的选定以及荧光强度测定条件的参数选择；藻细胞浓度：1×10⁶/ml-8×10⁶/ml；藻液体积：5ml；Nile red在水相的溶度：0.5-4μg/ml；漩涡震荡时间：0.5-4min。优点：该方法免去了传统干重法油脂测定法中必须制定干燥的藻粉及油脂的提取等繁琐的步骤，直接利用活细胞的藻液实时快速精确测定油脂含量，实现了高通量快速筛选出高油脂含量的微藻株。

主权项

一种实时检测活体藻细胞油脂含量的荧光分光光度法，其特征是：藻细胞油脂含量的荧光分光光度法：不同种属和不同形态的微藻其结构和形状存在的差异，针对所述的微藻进行实验、测定，不同种属和不同形态的微藻所需的染色条件有所不同，包括有藻细胞溶液浓度的选择，荧光染色剂剂量的选定，染色过程的环境的选定以及荧光强度测定条件的参数选择；藻细胞浓度：1×10⁶/ml‑8×10⁶/ml；藻液体积：5ml；Nile red在水相的溶度：0.5‑4μg/ml；漩涡震荡时间：0.5‑4min；具体步骤如下：（1）、小球藻油脂含量的测定方法：制备含几组相同浓度的悬浮藻细胞，将Nile red用有机溶剂溶解成0.1mg/ml后按相同剂量加入到藻悬液中；所述的有机溶剂必须经过检测具有水溶性和细胞渗透性；所述的有机溶剂为二甲亚砜；（2）、控制染色过程的混合悬液震荡的时间参数为0.5‑4min，溶液pH: 6‑8参数，确定最佳染色操作过程，操作参数通过荧光显微镜观察来确定；在荧光显微镜下的A组和B组，在两种条件下的细胞形态和颜色确定染色过程的完成；A组：染色完全的藻细胞，在荧光条件下呈绿色；B组：未染色的藻细胞，在荧光条件下呈红色；（3）、实验确定发射波，通过荧光扫描确定合适的发射光波长，不同的藻细胞实验发射波的波长范围为蓝光激发光源下420‑490nm；（4）、针对不同种属的微藻优化不同的实验操作参数，制定标准的测定方法。