[发明专利]一种检测单碱基突变的方法及应用

摘要

本发明公开了一种检测单碱基突变的方法及应用，包括针对待测样本与参照的目标区段设计引物，PCR分别扩增；将扩增产物等量混合，高温变性再退火获得异质双链DNA，再经CEL I酶切，酶切产物电泳检测确定单碱基突变样本；回收其中被CEL I酶切开的两个片段，每个片段分别与带A、T、G或C粘性末端的接头连接；用于扩增目标片段的上下游引物中的一条和基于接头序列设计的正反向引物中的一条组成两对引物，分别以每个连接产物为模板，进行PCR扩增；电泳检测。本发明公开的检测单碱基突变的方法，既可以检测已知的单碱基突变，也可以筛查未知的单碱基突变，既可以确定突变的位置，又可以确定突变的类型，灵敏度高、重复性好又经济。

主权项

1.一种非疾病诊断为目的的检测单碱基突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)根据需要检测的目标基因或DNA片段的序列设计引物，对待测样本和参照分别进行PCR扩增；(2)将两组扩增产物形成的异质双链产物用CEL I酶切，酶切产物经电泳检测确定单碱基突变；(3)回收CEL I酶所切开的两个片段，每个片段分别与带有A、T、G或C粘性末端的4种人工接头连接；(4)把基于人工接头序列设计的反向引物与扩增目标基因或DNA片段的上游引物以及基于人工接头序列设计的正向引物与扩增目标基因或DNA片段的下游引物组成两对引物，分别以每个连接产物为模板进行PCR扩增；(5)对所有PCR产物进行电泳检测，所得结果与单碱基错配类型的对应关系如下：其中“√”表示有扩增。