[发明专利]一种用于长牡蛎亲子鉴定的微卫星多重PCR方法

摘要

本发明公开了一种用于长牡蛎亲子鉴定的微卫星多重PCR方法，该方法包括如下步骤：提取亲本和子代DNA；使用18个微卫星位点及带荧光标记的M13（‑21）通用引物，对提取的DNA样本进行多重PCR扩增；对扩增产物的荧光信号进行检测，获得亲本和子代基因型数据；对亲本和子代进行亲缘关系鉴定。经验证，使用本发明2组多重PCR组合对12个长牡蛎全同胞家系进行亲子鉴定，即可达到100%的鉴定成功率。本发明为长牡蛎提供了一套经济有效、准确度高的基于DNA标记的亲子鉴定技术。通过微卫星标记鉴定获得的系谱关系记录，可以将长牡蛎个体追溯到其产出地，从而建立牡蛎产品的跟踪与溯源技术，为解决当今社会人们日益关注的食品安全问题提供有力的技术支持。

主权项

1.一种用于长牡蛎亲子鉴定的微卫星多重PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取长牡蛎亲本和子代个体的DNA；(2)长牡蛎多态性微卫星引物的筛选：根据引物筛选软件以及现有文献记载的长牡蛎引物序列，合成引物，并通过对长牡蛎个体进行PCR扩增，筛选出扩增稳定、特异性强的引物，所述引物包括正向引物、反向引物以及通用引物，所述通用引物上带有荧光标记；所述引物序列如下：该引物序列包括18种正、反向引物以及1种带有荧光标记的通用引物序列；(3)对步骤(1)得到的长牡蛎亲本和子代个体的DNA进行多重PCR扩增：对步骤(2)中筛选得到的引物进行组合，并通过优化PCR反应条件得到6组多重PCR组合；所述的6组多重PCR组合如下：(4)获得长牡蛎亲本和子代的基因型数据：对步骤(3)得到的多重PCR扩增产物进行荧光信号检测，从而获得亲本和子代的基因型数据；(5)通过基因序列分析软件对上述得到的基因型数据进行分析对比，以对长牡蛎亲本和子代进行亲缘关系鉴定。