[发明专利]一种石油降解菌剂及其制备方法

摘要

本发明涉及一种石油降解菌剂；还涉及一种上述石油降解菌剂的制备方法。本发明的石油降解菌剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将惰性柄杆菌、近平滑假丝酵母、抗酚小短杆菌、球形节细菌以及鲑色锁掷孢酵母菌种分别进行扩大培养至菌体浓度为10⁹～10¹⁰cfu/g，并按照3∶2∶2∶1∶1的质量比混合均匀，得混合菌种；(2)将混合菌种在液体发酵培养基中发酵48‑60小时；(3)离心分离得粘稠状菌体细胞；(4)将粘稠状菌体细胞和0.9％NaCl溶液和海泥浸出液混匀；(5)添加营养物质后在4℃条件下密封保存。本发明对石油的降解率高。

主权项

1.一种石油降解菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将惰性柄杆菌(Caulobacter segnis)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、抗酚小短杆菌(Brachybacterium phenoliresistens)、球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)以及鲑色锁掷孢酵母(Sporidiobolus salmonicolor)菌种分别进行扩大培养至菌体浓度为10⁹～10¹⁰cfu/g，将惰性柄杆菌、近平滑假丝酵母、抗酚小短杆菌、球形节杆菌以及鲑色锁掷孢酵母按照3∶2∶2∶1∶1的质量比混合均匀，得混合菌种；(2)将液体发酵培养基高压灭菌15‑30min，在无菌操作台中，向灭菌处理的液体发酵培养基中接种步骤(1)所得的混合菌种，混合菌种与液体发酵培养基的重量比为1∶(10‑15)，将接种了混合菌种的液体发酵培养基置于恒温水浴摇床，在140rpm、27‑30℃条件下连续发酵48‑60小时；(3)用酵母分离离心机离心分离除去发酵液中的水，把离心获得的粘稠状菌体充分搅拌以混合均匀，获得粘稠状菌体细胞；(4)向步骤(3)所得的粘稠状菌体细胞中加入灭菌后的0.9％NaCl溶液和海泥浸出液，并混合均匀，得菌体混合溶液，所述0.9％NaCl溶液与粘稠状菌体细胞的重量比为1∶(20‑40)，所述海泥浸出液与粘稠状菌体细胞的重量比为1∶(0.5‑0.8)；(5)称取重量份数为15‑20份的糯稻根、15‑20份的蜂房、10‑15份的石榴皮，将称量好的糯稻根、蜂房、石榴皮混合均匀，将混合物高压灭菌15‑30min，将灭菌后的混合物和步骤(4)所得的菌体混合溶液按照1∶2的重量比混合均匀；于37℃恒温培养2‑5天，得到固体菌剂并在4℃条件下密封保存；所述惰性柄杆菌(Caulobacter segnis)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，CGMCC菌种编号NO.4.1475；所述近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，CICC菌种编号为NO.1693；所述抗酚小短杆菌(Brachybacterium phenoliresistens)，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，CICC菌种编号为NO.23825；所述球形节杆菌，拉丁学名Arthrobacter globiformis，属于细菌界Bacteria，放线菌门Actinobacteria，放线菌纲Actinobacteria，放线菌目Actinomycetales，微球菌科Micrococcaceae，节细菌属Arthrobacter；所述鲑色锁掷孢酵母(Sporidiobolus salmonicolor)，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，CICC菌种编号为NO.31636；所述液体发酵培养基的配方如下：1L的液体发酵培养基中含有5‑8g的酵母粉、5‑8g麦麸、16‑20g蛋白胨、4‑6g葡萄糖、8‑12g玉米淀粉、0.6‑1g贝壳粉、0.5‑0.9g膨润土、0.8‑1.2g的MgSO₄·7H₂O、0.3‑0.6g的Na₂HPO₄、0.1‑0.3g磷酸二氢钾、余量的去离子水定容至1L；所述海泥浸出液的制备方法为：将海泥用粉碎机粉碎，过150目筛，过筛后加入提取罐中，将质量浓度为50％的酒精加入提取罐中，酒精用量为海泥重量的15倍，开启搅拌，将提取罐置于恒温水浴摇床，在140rpm、70‑80℃条件下提取30min，100目过滤取滤液，滤渣返回提取罐中重复提取一次，100目过滤取滤液，合并两次所得滤液，得海泥浸出液。