[发明专利]抗乙肝表面抗原的荧光抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种抗乙肝表面抗原的荧光抗体的制备方法，通过合成M.Barkeri的吡咯赖氨酸氨酰-tRNA合成酶(PylRS)的DNA序列，并将所述DNA序列连接到pPICZ质粒上；通过设计抗HBsAg抗体的突变DNA序列，将所述突变DNA与质粒pPIC9K重组，获得pPIC9K-antiHBsAg；通过将线性化质粒pPICZ-CouKRS、pPIC9K-antiHBsAg电击转化、筛选和验证，获得了制备抗乙肝表面抗原荧光抗体的真核生物表达系统，从而实现了抗乙肝表面抗原荧光抗体的制备。本发明抗乙肝表面抗原的荧光抗体的制备方法提高了HBsAg检测的灵敏度，加强了对乙肝发病的监控力度。

主权项

一种抗乙肝表面抗原的荧光抗体的制备方法，其特征在于，所述抗乙肝表面抗原的荧光抗体的制备方法包括如下步骤：S1：获得M.Barkeri PylRS突变库；S2：获得香豆素赖氨酸；S3：筛选特异识别7‑羟基香豆素的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶(CouKRS)突变体；S4：将步骤S3中的吡咯赖氨酸氨酰‑tRNA合成酶突变体的编码基因coukrs与毕赤酵母表达质粒pPICZ重组，获得酵母表达质粒pPICZ‑CouKRS；S5：设计抗HBsAg抗体的突变DNA序列，获得该突变体，将所述抗HBsAg抗体的突变DNA序列与质粒pPIC9K重组，获得酵母表达质粒pPIC9K‑antiHBsAg；S6：将步骤S4获得的pPICZ‑CouKRS线性化，将步骤S5获得的pPIC9K‑antiHBsAg线性化；S7：将步骤S6线性化后的pPICZ‑CouKRS和线性化后的pPIC9K‑antiHBsAg按照第一预设的比例混合，经过电击转化，导入到毕赤酵母X33中，获得菌株A；S8：将步骤S7获得的菌株A进行抗性筛选，获得阳性菌株组B；S9：将步骤S8获得的阳性菌株组B分别进行PCR筛选鉴定，获得若干个阳性菌株组C；S10：将步骤S9获得的阳性菌株组C中的单克隆酵母涂布于含有G418的YPDS固体培养基中培养，以验证所述单克隆酵母的G418抗性，若验证成功，则获得具备识别并携带7‑羟基香豆素插入到抗乙肝表面抗原抗体的63位点的单克隆酵母D；S11：将步骤S10获得的单克隆酵母D扩大培养、离心、超声破碎以及镍柱纯化得到抗乙肝表面抗原荧光抗体。