[发明专利]一种基因组DNA序列精准编辑方法在审
| 申请号： | 201610031817.4 | 申请日： | 2016-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN105567734A | 公开（公告）日： | 2016-05-11 |
| 发明（设计）人： | 李东升;丁妍;卢智勇 | 申请（专利权）人： | 丹弥优生物技术（湖北）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 张涛 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖开发区高新大道*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基因组DNA序列精准编辑方法，联合利用TALEN、CRISPR/Cas9等基因打靶技术和同源重组技术对基因组DNA序列精准编辑。本方法解决了现有技术中无法删除某特定序列等技术难点，能够定点、无缝隙地插入或删除特定的碱基序列，首次实现了真核细胞基因组DNA序列无缝隙的任意改造。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因组 dna 序列 精准 编辑 方法 | ||
【主权项】：
一种基因组DNA序列精准编辑方法，按如下步骤进行：1)构建一个两侧由同源序列组成的任意突变基因；2)以目标位点一侧为靶点设计相应的TALEN或CRISPR/Cas9；3)将该预先构造好的donor DNA与TELEN或CRISPR/Cas9同时转染到操作细胞内；导致该基因靶点处双链断开，并且随后部分断端会以donor DNA为模板进行修复；4)通过单细胞克隆培养与基因测序，筛选出单等位基因修饰的细胞株；当两个等位基因均发生了预期突变，基因组DNA序列精准编辑即告成功；所述donor DNA含突变内容和相关基因的同源序列；所述TALEN或CRISPR/Cas9是能够特异性地分别与靶点的两侧或单侧结合从而导致靶点处DAN双链断开的质粒；TALEN是一对质粒，CRISPR/Cas9是单质粒。
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