[发明专利]鉴定纯合型TT51-1和杂合型Bt汕优63的方法

摘要

本发明公开了一种鉴定纯合型TT51-1和杂合型Bt汕优63的方法，涉及分子生物学及转基因检测技术领域。本方法是：①收集；②微滴生成，分别以TT51-1、Bt汕优63和珍汕97A的基因组DNA为研究模板；③PCR扩增；                                                ④数据读取与分析，如果TT51-1品系中TT51-1特异性转化事件和水稻内标准基因PLD目标分子拷贝数95%置信区间存在重叠，判定为纯合型TT51-1；如果TT51-1衍生品系中TT51-1特异性转化事件拷贝数95%置信区间的两倍和水稻内标准基因PLD目标分子拷贝数95%置信区间存在重叠，则判定为杂合型Bt汕优63。本发明是一种快速、准确、可靠和低成本的鉴定方法。

主权项

一种基于微滴式数字PCR鉴定纯合型TT51‑1和杂合型Bt汕优63转基因水稻植株的方法，其特征在于：①收集采用国家标准《转基因植物及其产品成分检测抗虫水稻TT51‑1及其衍生品种定量PCR方法》（农业部2122号公告—8—2014），TT51‑1引物序列：TT51‑1F：5’‑AGAGACTGGTGATTTCAGCGGG‑3’，TT51‑1R：5’‑GCGTCCAGAAGGAAAAGGAATA‑3’；TT51‑1探针序列：TT51‑1P：5’‑FAM‑ATCTGCCCCAGCACTCGTCCG‑BHQ1‑3’；内标准基因PLD引物序列：KVM159:TGGTGAGCGTTTTGCAGTCT，KVM160: CTGATCCACTAGCAGGAGGTCC；内标准基因PLD探针序列：TM013：5’‑FAM‑TGTTGTGCTGCCAATGTGGCCTG‑BHQ1‑3’；②微滴生成分别以TT51‑1、Bt汕优63和珍汕97A 的基因组DNA为研究模板，分别利用上述引物探针组合，将TT51‑1、Bt汕优63和珍汕97A 的基因组DNA用水稀释至25ng/μL的浓度，配置20μL样品PCR反应体系，将20μL样品反应体系和70μL的油分别加入DG8 catridge微滴生成卡中，平稳放置于微滴生成仪中，生成微滴；③PCR扩增利用8通道排枪将生成的微滴转移至96空板内，在96孔普通PCR仪上进行PCR扩增反应；数据读取与分析利用微滴读取仪对完成PCR扩增的96孔板扩增数据进行读取，根据自动分析的结果，分别计算TT51‑1特异性转化事件和水稻内标准基因PLD目标分子拷贝数及95%置信区间；如果TT51‑1品系中TT51‑1特异性转化事件和水稻内标准基因PLD目标分子拷贝数95%置信区间存在重叠，判定为纯合型TT51‑1；如果TT51‑1衍生品系中TT51‑1特异性转化事件拷贝数95%置信区间的两倍和水稻内标准基因PLD目标分子拷贝数95%置信区间存在重叠，则判定为杂合型Bt汕优63；所述的TT51‑1是转基因抗虫水稻品种，Bt汕优63是TT51‑1同常规水稻品种珍汕97A杂交后的衍生品种。