[发明专利]病毒性出血性败血症病毒可视化核酸试纸条检测引物组和检测方法

摘要

本发明公开了一种病毒性出血性败血症病毒(VHSV)可视化核酸试纸条检测引物组和检测方法，所述引物的序列如下：VHSV281‑F：5’‑FITC‑CAGGCGTTGTCCGTGCTTCT‑3’，5’端标记FITC；VHSV281‑R：5’‑biotin‑TCCCCGAGTTTCTTGGTGATGTA‑3’，5’端标记biotin。检测方法，包括以下步骤：①RT‑PCR扩增；②PCR产物试纸条检测试验。本发明的方法具有操作便利、特异性强、灵敏度高，结果直观、稳定、可靠、对环境友好等多项优点，适合口岸检疫实验室进行VHSV的快速筛查，提高了出入境口岸的鉴定工作效率，能更好地适应进出口贸易快速通关的要求，所使用的RT‑PCR产物检测试纸条是个通用型试纸条，可以广泛应用于ＰＣＲ诊断试剂的开发，该检测方法无需电泳仪、凝胶成像仪等仪器设备投入，应用成本低，对于ＰＣＲ检测方法在基层实验室的推广应用将有着巨大的推动作用。

主权项

1.病毒性出血性败血症病毒可视化核酸试纸条检测试剂盒，其特征在于，包括下列成分：（1）2×RT‑PCR Buffer 12.5μL；（2）PrimeScript 1 Step Enzyme Mix，1μL；（3） RNase Free dH2O，8.5μL；（4）上游引物VHSV281‑F和下游引物VHSV281‑R，浓度都是10μM，各1μL；（5）模板1μL；其中上游引物VHSV281‑F和下游引物VHSV281‑R的序列如下：VHSV281‑F：5’‑FITC‑CAGGCGTTGTCCGTGCTTCT‑3’，5’端标记FITC；VHSV281‑R：5’‑biotin‑TCCCCGAGTTTCTTGGTGATGTA‑3’，5’端标记biotin；检测方法，包括以下步骤：①RT‑PCR扩增提取VHSV总RNA，进行RT‑PCR扩增，具体参数为：45℃ 10 min进行逆转录；95℃ 10 min热启动；然后进行35 次PCR循环，PCR循环条件：94℃ 30s, 55℃ 30s, 72℃ 30s；72 ℃ 7min；4℃保温；②PCR产物试纸条检测试验取5 μL扩增产物滴加在试纸条的样品垫上，同时滴加2～3滴缓冲液，10 min后观察质控线、检测线，判读出阴、阳性的结果；所述的缓冲液是RT‑PCR产物检测试纸条配套的缓冲液；在检测带区域出现明显红色条带为阳性，否则为阴性。