[发明专利]一种透明颤菌血红蛋白可视化标签融合蛋白表达体系、构建方法及应用在审
| 申请号： | 201610054950.1 | 申请日： | 2016-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN105543263A | 公开（公告）日： | 2016-05-04 |
| 发明（设计）人： | 李正强;李海超;米梦丹;张作明;许浩然 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02 |
| 代理公司： | 长春吉大专利代理有限责任公司 22201 | 代理人： | 王淑秋;王恩远 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 一种透明颤菌血红蛋白可视化标签融合蛋白表达体系、构建方法及其在蛋白纯化中的应用，属于生物工程技术领域。本发明在透明颤菌血红蛋白基因上游加上一段厌氧启动子序列，下游通过链接集团与一种嗜热碱性果胶酶目的基因连接(目的基因不具有唯一性)，以pUC19为表达载体，在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中实现共表达，每升培养基可获得20mg融合蛋白。由于融合蛋白呈鲜红色，便于跟踪，因此大大降低纯化纯化难度，在蛋白纯化领域具有很高参考价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 透明 血红蛋白 可视化 标签 融合 蛋白 表达 体系 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种透明颤菌血红蛋白可视化标签融合蛋白表达体系的构建方法，其步骤如下：(1)合成厌氧启动子序列，将该厌氧启动子序列与pUC19表达载体分别双酶切后相连，获得重组载体pUC19+promoter；(2)以Vitreoscilla基因组为模板，设计引物，通过PCR反应获得3’端含甘氨酸链接基团和凝血酶切割位点基因的透明颤菌血红蛋白基因序列vgb’；(3)将步骤(2)得到的基因序列vgb’与步骤(1)得到的重组载体pUC19+promoter分别双酶切后连接，获得重组载体pUC19+promoter+vgb’；(4)以pET20b(+)‑PelC‑CD为模板，设计引物，通过PCR反应扩增得到3’端含有6个组氨酸标签基因的嗜热碱性果胶裂解酶基因CD；(5)将步骤(4)得到的裂解酶基因CD与步骤(3)得到的重组载体pUC19+promoter+vgb’分别双酶切后连接，获得重组载体pUC19+promoter+vgb’+CD；(6)将重组表达载体pUC19+promoter+vgb’+CD转化到大肠杆菌表达宿主E.coli BL21(DE3)中，得到可视化标签融合蛋白表达体系。
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