[发明专利]一种龙眼快速转基因方法

摘要

本发明提供了龙眼快速转基因方法，属于转基因植物制备领域。它包括龙眼实生幼苗的准备，转化载体根癌农杆菌侵染菌液的准备，实生幼苗去顶芽或去顶（切除带叶的上部）材料的制备、侵染和共培养，抗性芽的筛选与培养，再生抗性芽的分子生物学鉴定，转基因植株的移植。完全不依赖植物组织培养，以直播的实生幼苗的去顶芽和去顶材料进行侵染，获得转基因植株；不需培育无菌试管苗、胚状体和悬浮细胞，转基因抗性芽不需继代转接，成活率高，在温室中进行不受气候与环境影响，周年可进行转化。本方法操作步骤简便、成本降低、时间更短。

主权项

1.一种龙眼快速转基因方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)龙眼直播实生幼苗的准备；(2)转化载体根癌农杆菌侵染菌液的准备；(3)实生幼苗去顶芽或去顶、切除带叶的上部材料的制备、侵染和共培养；(4)去顶芽和去顶幼苗的抗性芽筛选与培养；(5)再生抗性芽的分子生物学鉴定；(6)转基因植株的移植；步骤(1)所述的龙眼直播实生幼苗准备方法为：取8成熟以上的龙眼，剥去果皮与果肉，选健康饱满的种子，用清水洗种子后直播于穴盘的营养土中，每穴播1粒种子，25℃温室中暗培养1周，待种子萌发出土后，转移至25℃温室中光照培养2周，至4片真叶期；步骤(3) 实生幼苗去顶芽材料制备、侵染方法为：将4片真叶期幼苗的顶芽去掉保留真叶，用棉花吸取OD600为0.4‑1.0的根癌农杆菌菌液后，用摄子将带菌液的棉花紧贴在去顶芽的位置侵染20 min后，用新的带侵染菌液棉花再次侵染20 min，弃带侵染菌液棉花，将吸有无菌水的棉花贴在去顶芽处保湿；步骤(3) 实生幼苗去顶材料制备、侵染方法为：将4片真叶期实生幼苗去顶，所述去顶为切除带叶的上部，茎部保留1.5cm‑3.5cm，用可拉伸的封口膜或保鲜膜在茎部的切口处缠绕成一小塑料杯形，将OD600为0.4‑1.0的根癌农杆菌菌液用移液器转移60 ul至小塑料杯形内，在切口处侵染20 min，用棉花吸干后再重复侵染20 min，用棉花吸干，将封口膜或保鲜膜封住切口保湿；步骤(3)所述的共培养为：在28℃下暗培养4天。