[发明专利]一种布美诺肽的固相合成方法

摘要

本发明属于多肽合成领域，具体涉及以Rink Amide Resin为固相载体，以HO‑(CH₂)_n‑COOH作为连接固相载体与目标肽的Linker，其中，羧基端通过酰胺键与固相载体相连，羟基端通过酯键与目标肽相连。该技术方案与现有技术相比，通过在固相载体及布美诺肽之间引入长链脂肪酸，大大优化了目标肽固相成环的空间环境，避免了液相方式成环时所发生的分子间偶联，最终目标肽‑Linker纯度达到85％以上，纯化总收率达到50％以上，精肽纯度达到99％以上。

主权项

1.一种布美诺肽的固相合成方法，包括如下步骤：(a)：Rink Amide Resin与长链脂肪羟基酸HO‑(CH2)n‑COOH偶联合成HO‑(CH2)n‑CONH‑Rink Amide Resin；(b)：依照布美诺肽序列，在偶联剂存在条件下，依次偶联Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH，Fmoc‑Trp(Boc)‑OH，Fmoc‑Arg(pbf)‑OH，Fmoc‑D‑Phe‑OH，Fmoc‑His(Boc)‑OH，Fmoc‑Asp(O‑2‑Phipr)‑OH，Fmoc‑Nle‑OH，Fmoc‑Nle‑OH偶联完成后脱除Fmoc保护基，以乙酸酐/吡啶进行乙酰化，得AC‑Nle‑Asp(O‑2‑Phipr)‑His(Boc)‑D‑Phe‑Arg(pbf)‑Trp(Boc)‑Lys(Mtt)‑O‑(CH2)n‑CONH‑Rink Amide Resin；(c)：采用TFA/DCM溶液，选择性脱除Lys侧链保护基Mtt，Asp侧链保护基O‑2‑Phipr，得AC‑Nle‑Asp‑His(Boc)‑D‑Phe‑Arg(pbf)‑Trp(Boc)‑Lys‑O‑(CH2)n‑CONH‑Rink Amide Resin；(d)：在偶联剂存在条件下进行树脂上环化，得：AC‑Nle‑[Asp‑His(Boc)‑D‑Phe‑Arg(pbf)‑Trp(Boc)‑Lys]cycle‑O‑(CH2)n‑CONH‑Rink Amide Resin；(e)：在裂解剂存在条件下，将肽树脂裂解及侧链脱保护，得：AC‑Nle‑[Asp‑His‑D‑Phe‑Arg‑Trp‑Lys]cycle‑O‑(CH2)n‑CONH2；(f)：以乙腈/水将AC‑Nle‑[Asp‑His‑D‑Phe‑Arg‑Trp‑Lys]cycle‑O‑(CH2)n‑CONH2溶解，在碱性条件下酯键水解，溶液调酸后得布美诺肽粗肽；(g)：布美诺肽粗肽经过纯化，冻干，得布美诺肽精肽。