[发明专利]一种砀山酥梨遗传转化方法有效
| 申请号： | 201610076734.7 | 申请日： | 2016-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN105543278B | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 蔡永萍;程曦;金青;李姝妹;张金云;闫冲冲;马晨辉;程俊;孙宁 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/74 |
| 代理公司： | 34148 合肥兴东知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王伟 |
| 地址： | 230036 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明一种砀山酥梨遗传转化方法，包括以下步骤：(1)遗传转化受体的建立；(2)农杆菌的培养及侵染液的配置；(3)侵染与共培养；(4)除菌培养与筛选培养；(5)抗性愈伤组织GUS染色鉴定。本发明以砀山酥梨愈伤组织为受体，以NptII为标记基因，以GUS基因为报告基因，通过农杆菌EHA105介导的方法进行砀山酥梨的遗传转化，获得阳性愈伤组织，然后即可通过阳性愈伤组织再分化为试管苗；本发明首先建立起一种以砀山酥梨当年生新稍为外植体诱导出愈伤组织，进而进行遗传转化的方法，砀山酥梨春季新稍酚类物质含量低，而且携带病菌量少，接种褐化率和污染率都很低，而且取材方便，愈伤组织诱导率高，能够满足遗传转化的需求。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 砀山 遗传 转化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种砀山酥梨遗传转化方法，包括以下步骤：/n(1)遗传转化受体的建立/n以砀山酥梨当年生新梢为外植体，接种在愈伤组织诱导培养基表面诱导培养出愈伤组织，即为遗传转化受体；所述愈伤组织诱导培养基配方为：MS+6-BA 1.0～2.0mg/L+IBA 0.2～0.6mg/L+20～30g/L蔗糖+6～7g/L琼脂+0.1～0.2g/L活性炭，愈伤组织诱导培养基的pH值为5.8～6.0；诱导培养的环境为16小时光照、8小时黑暗光周期培养室，光强1500～2000lx，温度25℃；/n(2)农杆菌的培养及侵染液的配制/n将带有目的基因质粒的农杆菌EHA105在LB固体培养基上划线活化，再用LB液体培养基培养至OD值达到0.6～0.8，并进行菌液PCR验证，确保质粒没有丢失，然后离心收集菌体，用液体愈伤分化培养基悬浮后培养2～3小时，即为侵染液；/n(3)侵染与共培养/n将愈伤组织浸泡在侵染液中，在28℃、50r/min条件下侵染10分钟，取出后用无菌滤纸吸干多余菌液，然后接种在共培养培养基上培养48～60小时；/n所述共培养培养基配方为：1/2MS+6-BA 2.5～3.0mg/L+IBA 0.2～0.4mg/L+10～20g/L山梨醇+AgNO
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于安徽农业大学，未经安徽农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610076734.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
